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[交流]
【求助/交流】western blot中，蛋白經(jīng)SDSPAGE后不是變性了嗎，怎么還能和一抗結(jié)合？ 已有12人參與
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western blot中，蛋白經(jīng)SDSPAGE后不是變性了嗎？ 天然構(gòu)想被破壞了，特異性識別位點(diǎn)也被破壞了，怎么還能和一抗結(jié)合？ |
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lstt09nk(金幣+2):感謝交流~~ 2010-06-02 17:46:31
spiderboy(金幣+1):好像是做SDS-PAGE，而不是PAGE吧 2010-06-04 11:23:27
lstt09nk(金幣+2):感謝交流~~ 2010-06-02 17:46:31
spiderboy(金幣+1):好像是做SDS-PAGE，而不是PAGE吧 2010-06-04 11:23:27
| 與Southern或Northern雜交方法類似，但Western Blot采用的是聚丙烯酰胺凝膠電泳，被檢測物是蛋白質(zhì)，“探針”是抗體，“顯色”用標(biāo)記的二抗。經(jīng)過PAGE分離的蛋白質(zhì)樣品，轉(zhuǎn)移到固相載體（例如硝酸纖維素薄膜）上，固相載體以非共價鍵形式吸附蛋白質(zhì)，且能保持電泳分離的多肽類型及其生物學(xué)活性不變。以固相載體上的蛋白質(zhì)或多肽作為抗原，與對應(yīng)的抗體起免疫反應(yīng)，再與酶或同位素標(biāo)記的第二抗體起反應(yīng)，經(jīng)過底物顯色或放射自顯影以檢測電泳分離的特異性目的基因表達(dá)的蛋白成分。該技術(shù)也廣泛應(yīng)用于檢測蛋白水平的表達(dá)。 |
9樓2010-06-02 07:24:54
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