 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 查看: 5255 | 回復(fù): 16 | |||
[求助]
western 中，目的蛋白沒有，但是Marker 暴出來了，什么原因啊
|
|||
|
各位蟲友： 我最近在做Western 實(shí)驗(yàn)，奇怪的是，目的蛋白沒出來，Marker 和一些很大分子量的雜蛋白暴出來了，到底是什么原因啊？ 1. 我把ECL 染液滴到二抗上，它會發(fā)光，而且有雜蛋白暴出來，說明染液和二抗也沒問題吧？ 2.我在轉(zhuǎn)膜后，用立春紅對NC膜進(jìn)行了染色，條帶很清晰，對轉(zhuǎn)膜后的凝膠用考馬斯亮藍(lán)進(jìn)行染色，條帶很弱， 說明我的轉(zhuǎn)膜是成功的。 3.我用1：1000的比例稀釋一抗，在 4度下孵育過夜，第二天在孵育二抗，進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。 4.在滴上顯色液后，MARKER 位置上會顯示很亮的熒光，可其余地方?jīng)]有，就讓我很奇怪。 自己初學(xué)，沒什么經(jīng)驗(yàn)，希望得到大家的指導(dǎo)，謝謝 |
回復(fù)此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生物學(xué) |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：實(shí)驗(yàn)器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)中的趣事：和實(shí)驗(yàn)材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費(fèi)?
已經(jīng)有86人回復(fù)
-
蛋白質(zhì)檢測：精準(zhǔn)分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計，解析生命機(jī)制的重要載體
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 有沒有人用Western blot在做17kDa蛋白質(zhì),求經(jīng)驗(yàn)！��！
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 小分子蛋白電泳marker
已經(jīng)有15人回復(fù)
- 原核表達(dá)中目的蛋白不明確
已經(jīng)有7人回復(fù)
- western blot中蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)印問題
已經(jīng)有17人回復(fù)
- 基因沒有變化但是蛋白減少會是什么原因呢？
已經(jīng)有4人回復(fù)
- Western Blot實(shí)驗(yàn)的蛋白條帶都連在一起
已經(jīng)有37人回復(fù)
- 有沒有500kDa以上的Marker蛋白
已經(jīng)有3人回復(fù)
- western blot時marker問題求助
已經(jīng)有18人回復(fù)
- Western Blot電泳蛋白質(zhì)外漏問題求助
已經(jīng)有22人回復(fù)
- 【求助/交流】western blot中，蛋白經(jīng)SDSPAGE后不是變性了嗎，怎么還能和一抗結(jié)合？
已經(jīng)有13人回復(fù)
- Western Blot 磷酸化蛋白測定問題
已經(jīng)有9人回復(fù)
ankang0910
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 19 (小學(xué)生)
- 金幣: 826
- 散金: 2008
- 紅花: 6
- 帖子: 330
- 在線: 146.6小時
- 蟲號: 1062441
- 注冊: 2010-07-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 醫(yī)學(xué)免疫學(xué)
【答案】應(yīng)助回帖
|
的確，理論上marker是不能顯影的，因?yàn)樗荒芘c你的特異性很強(qiáng)的一抗反應(yīng)。但marker也是蛋白，也就會存在與IgG抗體結(jié)合的可能性。有些公司生產(chǎn)的marker就明確指出可以和各類IgG抗體反應(yīng)，以達(dá)到顯影時出現(xiàn)marker條帶的目的。如果你的一抗不純，是多抗，特異性不好，或是反復(fù)用過很多次，誰也不敢保證不與marker反應(yīng)從而顯出條帶來。所以我才會猜測你的一抗有可能失效了。嘿嘿，以上是我個人的理解，希望可以幫到你。祝實(shí)驗(yàn)順利�。� |
12樓2012-07-23 10:49:38
14樓2012-07-23 16:37:19
2樓2012-07-20 11:50:50
3樓2012-07-20 16:50:10
ankang0910
金蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 19 (小學(xué)生)
- 金幣: 826
- 散金: 2008
- 紅花: 6
- 帖子: 330
- 在線: 146.6小時
- 蟲號: 1062441
- 注冊: 2010-07-22
- 性別: GG
- 專業(yè): 醫(yī)學(xué)免疫學(xué)
4樓2012-07-20 20:02:07
5樓2012-07-20 23:21:19
6樓2012-07-20 23:26:44
7樓2012-07-20 23:27:45
8樓2012-07-21 17:41:37
9樓2012-07-22 16:14:50
10樓2012-07-22 16:16:37
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 xingfuxiaoyu 的主題更新
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 281求調(diào)劑（0805） +3 | 煙汐憶海 2026-03-16 | 9/450 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 299求調(diào)劑 +4 | △小透明* 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 070300化學(xué)319求調(diào)劑 +4 | 錦鯉0909 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 268求調(diào)劑 +8 | 一定有學(xué)上- 2026-03-14 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +3 | p asserby. 2026-03-15 | 4/200 |
|
|
[考研] 一志愿南京大學(xué)，080500材料科學(xué)與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 289求調(diào)劑 +6 | 步川酷紫123 2026-03-11 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 278求調(diào)劑 +3 | Yy7400 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +3 | 聽風(fēng)就是雨； 2026-03-16 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 326求調(diào)劑 +4 | 諾貝爾化學(xué)獎覬?/a> 2026-03-15 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工 求調(diào)劑 +13 | enenenhui 2026-03-13 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 26考研一志愿中國石油大學(xué)(華東)305分求調(diào)劑 +3 | 嘉年新程 2026-03-15 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 294求調(diào)劑 +3 | Zys010410@ 2026-03-13 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 本科南京大學(xué)一志愿川大藥學(xué)327 +3 | 麥田耕者 2026-03-14 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 中科大材料專碩319求調(diào)劑 +3 | 孟鑫材料 2026-03-13 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 297一志愿上交085600求調(diào)劑 +5 | 指尖八千里 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 材料與化工求調(diào)劑一志愿 985 總分 295 +8 | dream…… 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ADT 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 材料301分求調(diào)劑 +5 | Liyouyumairs 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考博] 26讀博 +4 | Rui135246 2026-03-12 | 10/500 |
|