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麥堂straw銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
原核表達(dá)中目的蛋白不明確
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初做蛋白表達(dá)，目的片段確定插入載體測序正確，用的BL21為宿主菌，嘗試了各種條件，比如IPTG濃度有0.1mM、0.5mM、1mM，溫度有37，30，25，蛋白電泳結(jié)果分析均無明顯目的條帶，雖在Marker相近位置處有條帶表達(dá)，但未誘導(dǎo)前也有該條帶的表達(dá)，且誘導(dǎo)后條帶濃度的增加量并不是十分明顯，所以很糾結(jié)到底是不是想要的目的條帶。 請問各位大蝦，碰到這種情況，要怎么辦？我的蛋白帶了His標(biāo)簽，如果我做鎳柱純化的話可否驗證條帶的正確性，我怕如果那條條帶就算是目的條帶的話，表達(dá)量太少我一純化損失太多也看不到，求助我該如何處理？ |
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lxj341401
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麥堂straw
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4樓2012-05-27 09:32:23
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麥堂straw
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8樓2012-05-28 15:41:30
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