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麥堂straw銀蟲 (小有名氣)
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[求助]
原核表達(dá)中目的蛋白不明確
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初做蛋白表達(dá),目的片段確定插入載體測序正確,用的BL21為宿主菌,嘗試了各種條件,比如IPTG濃度有0.1mM、0.5mM、1mM,溫度有37,30,25,蛋白電泳結(jié)果分析均無明顯目的條帶,雖在Marker相近位置處有條帶表達(dá),但未誘導(dǎo)前也有該條帶的表達(dá),且誘導(dǎo)后條帶濃度的增加量并不是十分明顯,所以很糾結(jié)到底是不是想要的目的條帶。 請(qǐng)問各位大蝦,碰到這種情況,要怎么辦?我的蛋白帶了His標(biāo)簽,如果我做鎳柱純化的話可否驗(yàn)證條帶的正確性,我怕如果那條條帶就算是目的條帶的話,表達(dá)量太少我一純化損失太多也看不到,求助我該如何處理? |

至尊木蟲 (著名寫手)
銀蟲 (小有名氣)

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銀蟲 (初入文壇)
至尊木蟲 (職業(yè)作家)
銀蟲 (小有名氣)

鐵蟲 (初入文壇)
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