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xingxingkids金蟲 (著名寫手)
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[求助]
關于合成的引物DNA序列在260nm處沒有吸收峰，是怎么回事？？
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| 合成的引物，經(jīng)過離心溶解后，進行紫外測試，結果在260nm處竟然沒有吸收峰，請問可能是什么原因，謝謝！！ |
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6樓2013-06-08 18:41:06
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xingxingkids: 金幣+5, ★★★很有幫助, 非常感謝您的耐心解答。我會按照您的說法再去試一下，謝謝�。� 2013-06-09 12:23:48
xingxingkids: 金幣+5, ★★★很有幫助, 非常感謝您的耐心解答。我會按照您的說法再去試一下，謝謝�。� 2013-06-09 12:23:48
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我查了一下具體的用紫外光測定DNA的實驗流程，樓主的離心機轉速也太猛了。如果待測核酸中含有酸溶性的核苷酸或聚合的多核苷酸，則需要用鉬酸銨-過氯酸沉淀劑（鉬酸銨0.25%,過氯酸2.5%)沉淀離心后取上清液測定紫外260nm吸收峰。鉬酸銨-過氯酸沉淀劑（鉬酸銨0.25%,過氯酸2.5%)制備方法:取3.6mL70%過氯酸和0.25g鉬酸銨溶于96.4mL蒸餾水。 具體去除酸溶性的核苷酸或聚合的多核苷酸的實驗流程是：0.5mL 樣品DNA溶液和0.5mL蒸餾水，放入離心管A；0.5mL 樣品DNA溶液和0.5mL蒸餾水，放入離心管B，鉬酸銨-過氯酸沉淀劑搖勻，冰浴30分鐘，以3000轉/分離心10分鐘。然后分別從離心管A和離心管B中分別吸取0.4mL上清液到50mL容量瓶內(nèi)，定容到刻度。于紫外光光度計測定260nm處吸收峰。 你的實驗因為不需要測定DNA樣品的具體濃度，所以可以直接用蒸餾水作對照。但是你的離心機的轉速也未免太太大了。 另外說一下DNA溶液的濃度：每mL含有核酸（單鏈DNA，雙鏈DNA，RNA均可）5-50微克即可測定260nm和280nm的吸收峰，雙鏈DNA的每個堿基對的平均分子量是618. |
7樓2013-06-08 23:21:36
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xingxingkids: 金幣+2, ★★★很有幫助 2013-06-08 18:03:31
xingxingkids(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香，感謝你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-09 09:34:27
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xingxingkids(myprayer代發(fā)): 金幣+1, 贈人玫瑰手有余香，感謝你的慷慨解囊，期待你的精彩。 2013-06-09 09:34:27
| 是不是你的樣品濃度太大了，這時紫外光譜可能測不來。如果你的樣品中可能混有其他的大分子DNA則要用鉬酸銨-過氯酸沉淀劑（鉬酸銨0.25%,過氯酸2.5%)沉淀離心后取上清液測定紫外260nm吸收峰。鉬酸銨-過氯酸沉淀劑（鉬酸銨0.25%,過氯酸2.5%)制備方法:取3.6mL70%過氯酸和0.25g鉬酸銨溶于96.4mL蒸餾水。 |
3樓2013-06-08 17:45:14
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