 |
 |
 |
| 24小時熱門版塊排行榜 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 2081 | 回復(fù): 10 | ||||
| 當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
yhdchina新蟲 (初入文壇)
|
[交流]
怎樣能得到高純度的蛋白？ 已有4人參與
|
|||
| 我用Ni離子親和層析純化融合蛋白，6個His標(biāo)簽在載體端，然后柱上用腸激酶4°C過夜將載體與目的多肽切開，純化得到我的目的多肽（約4.2KDa），此多肽是存在于腸激酶緩沖液中的。在中科新生命用RP-HPLC測純度只有50%，不知道怎么回事，怎樣能得到純度>95%的蛋白呢？ |
回復(fù)此樓» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準(zhǔn)篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有87人回復(fù)
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復(fù)
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
留學(xué)--博士招生
已經(jīng)有16人回復(fù)
-
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限
已經(jīng)有4人回復(fù)
-
邵陽學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑
已經(jīng)有0人回復(fù)
-
湖北師范大學(xué)招調(diào)劑啦
已經(jīng)有3人回復(fù)
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- 原核表達形成了包涵體怎么辦啊？
已經(jīng)有22人回復(fù)
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
4樓2013-06-10 01:36:02
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經(jīng)驗: +218 - MolEPI: 44
- 應(yīng)助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結(jié)構(gòu)與功能
- 管轄: 生物科學(xué)綜合
★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 很詳細(xì)，鼓勵交流 2013-06-09 22:03:41
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 很詳細(xì)，鼓勵交流 2013-06-09 22:03:41
|
蛋白質(zhì)的親和層析的基礎(chǔ)是蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用或者蛋白質(zhì)-其他分子相互作用，這樣的相互作用的專一性很高，但是不是100%，因為蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用的表面積也就是1000-2000平方埃最多，少一些600平方埃也有，每個氨基酸殘基的表面積大的200平方埃，小的80平方埃，也就是說蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用也就是彼此6-10個氨基酸的表面的分子識別而已，不可能是絕對專一。所以抗體-抗原反應(yīng)還存在交叉反應(yīng)哪。蛋白質(zhì)-其他分子相互作用可能比蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用，因為至少有機和無機小分子的表面積一般達不到6個氨基酸殘基的表面積，所以可能分子識別的精確度會相對更低。所以不要完全寄希望于親和層析一步就能完成分離純化，之前之后都應(yīng)該使用別的蛋白質(zhì)分離純化方法。需要注意三個問題： 1.蛋白質(zhì)的親和層析應(yīng)該在蛋白質(zhì)的后期分離時使用，在親和層析之前樣品應(yīng)該用其他方法盡量純化，減少親和層析的分離純化負(fù)擔(dān)。蛋白質(zhì)分離純化的前期處理可用分級離心、沉淀、超濾和透析等粗分離方法；之后的細(xì)分離方法可用離子交換樹脂、分子篩層析、疏水層析等。要不輕易用電泳來分離純化，因為不好復(fù)性，用電泳做檢測比較好，然后還可以疏水層析和親和層析，親和層析之后可以再用分子篩層析和疏水層析。 2.蛋白質(zhì)的親和層析應(yīng)該不只使用一次，不要完全寄希望于親和層析一步就能完成分離純化。你的親和層析因為直接用了腸激酶切斷了（組氨酸）6親和標(biāo)簽，所以無法再重復(fù)親和層析了。實際上，至少第一次用Ni-（組氨酸）6親和層析不要用腸激酶切斷（組氨酸）6親和標(biāo)簽，而用咪唑分濃度梯度把目的蛋白質(zhì)從Ni-柱洗下來，這樣可以對洗下來的樣品多洗幾次，最后再用腸激酶切斷（組氨酸）6親和標(biāo)簽進行蛋白質(zhì)分離提純，這樣純度可以高得多。因為用腸激酶切斷（組氨酸）6親和標(biāo)簽進行蛋白質(zhì)分離提純是不可逆的，至此也意味著親和層析的結(jié)束。你要是一上來就用酶切的方法，那么親和層析只用了一次，蛋白質(zhì)純度當(dāng)然高不了。 3.親和層析不是必然的蛋白質(zhì)的分離純化工作的終點。蛋白質(zhì)的親和層析之后也可以再用其他的層析方法和樣品濃縮及凍干方法；必要時甚至可用電泳（如果能夠保證樣品充分回收和活性恢復(fù)的話）。 |
2樓2013-06-09 22:01:01
fuding6
木蟲 (小有名氣)
- 應(yīng)助: 15 (小學(xué)生)
- 金幣: 2939.6
- 帖子: 113
- 在線: 122.3小時
- 蟲號: 985064
- 注冊: 2010-03-29
- 專業(yè): 免疫學(xué)研究新技術(shù)與新方法
3樓2013-06-09 22:50:01
yxncas-2012
木蟲 (正式寫手)
- 應(yīng)助: 30 (小學(xué)生)
- 金幣: 2052.2
- 散金: 15
- 紅花: 4
- 帖子: 352
- 在線: 95小時
- 蟲號: 2147898
- 注冊: 2012-11-26
- 性別: GG
- 專業(yè): 蛋白質(zhì)組學(xué)
5樓2013-06-10 08:38:45
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 08工科求調(diào)劑286 +4 | tgs_001 2026-03-28 | 4/200 |
|
|---|---|---|---|---|
|
|
[考研] 材料工程專碩求調(diào)劑 +8 | hyl3153942 2026-03-29 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +10 | 家佳佳佳佳佳 2026-03-29 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 化學(xué)308分調(diào)劑 +7 | 你好明天你好 2026-03-30 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 生物技術(shù)與工程 +7 | 1294608413 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
[考研] 一志愿中南大學(xué)化學(xué)0703總分337求調(diào)劑 +6 | niko- 2026-03-27 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 考研調(diào)劑 +7 | 小蠟新筆 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 329求調(diào)劑 +10 | 鈕恩雪 2026-03-25 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 349求調(diào)劑 +6 | 李木子啊哈哈 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 0703化學(xué)調(diào)劑，求導(dǎo)師收 +9 | 天天好運來上岸?/a> 2026-03-24 | 10/500 |
|
|
|
[考研] 11408軟件工程求調(diào)劑 +3 | Qiu學(xué)ing 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 315分求調(diào)劑 +7 | 26考研上岸版26 2026-03-26 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 一志愿南師大0703化學(xué) 275求調(diào)劑 +4 | Ripcord上岸 2026-03-27 | 4/200 |
|
|
|
[考研]
 一志愿 西北大學(xué) 總分282 英語一62 求調(diào)劑
+7
|
18419759900 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 0856調(diào)劑 +5 | 求求讓我有書讀?/a> 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 調(diào)劑推薦 +5 | 清酒714 2026-03-26 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 打過很多競賽，085406控制工程300分，求調(diào)劑 +3 | askeladz 2026-03-26 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求調(diào)劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 網(wǎng)絡(luò)空間安全0839招調(diào)劑 +4 | w320357296 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 各位老師您好：本人初試372分 +5 | jj涌77 2026-03-25 | 6/300 |
|