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...山雨新蟲 (初入文壇)
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[求助]
inverse PCR 技術(shù)
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| 求助:做反向pcr克隆啟動子巨多日毫無結(jié)果。不知哪位同學(xué)做過反向pcr,有沒有具體的實驗操作流程(酶切和環(huán)化的具體細節(jié)方面),麻煩上傳一下。謝謝啦。 |
木蟲 (正式寫手)
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反向PCR的目的在于擴增一段已知序列旁側(cè)的DNA,也就是說這一反應(yīng)體系不是在一對引物之間而是在引物外側(cè)合成DNA。反向PCR可用于研究與已知DNA區(qū)段相連接的未知染色體序列,因此又稱為染色體步移。這時選擇的引物雖然與核心DNA兩末端序列互補,但引物3’端是相互反向的。 反向PCR的操作流程:擴增前先用限制性內(nèi)切酶酶切樣品DNA,然后用DNA連接酶連接成一個環(huán)狀分子,通過反向PCR擴增引物的上游片段和下游片段。 樓主加油! |

木蟲 (正式寫手)
新蟲 (初入文壇)
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