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...山雨新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
inverse PCR 技術(shù)
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| 求助：做反向pcr克隆啟動(dòng)子巨多日毫無(wú)結(jié)果。不知哪位同學(xué)做過(guò)反向pcr，有沒(méi)有具體的實(shí)驗(yàn)操作流程（酶切和環(huán)化的具體細(xì)節(jié)方面），麻煩上傳一下。謝謝啦。 |
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sunnyboylg
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
1949stone: 金幣+2, 鼓勵(lì) 2013-06-09 14:18:57
1949stone: 你的頭像我很喜歡啊 2013-06-09 14:20:02
...山雨: 金幣+15, ★★★很有幫助 2013-10-29 10:56:17
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反向PCR的目的在于擴(kuò)增一段已知序列旁側(cè)的DNA，也就是說(shuō)這一反應(yīng)體系不是在一對(duì)引物之間而是在引物外側(cè)合成DNA。反向PCR可用于研究與已知DNA區(qū)段相連接的未知染色體序列，因此又稱為染色體步移。這時(shí)選擇的引物雖然與核心DNA兩末端序列互補(bǔ)，但引物3’端是相互反向的。 反向PCR的操作流程：擴(kuò)增前先用限制性內(nèi)切酶酶切樣品DNA，然后用DNA連接酶連接成一個(gè)環(huán)狀分子，通過(guò)反向PCR擴(kuò)增引物的上游片段和下游片段。 樓主加油！ |
2樓2013-06-09 11:55:25
piaofu
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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3樓2013-08-03 10:43:06
...山雨
新蟲(chóng) (初入文壇)
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4樓2013-08-05 09:04:43
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