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關(guān)于體外轉(zhuǎn)錄的模板問題！急！
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我最近在做體外轉(zhuǎn)錄，用的是Promega的 T7 RiboMAX Express Large Scale RNA Production System Protocol。線性化的質(zhì)粒體外轉(zhuǎn)錄后只用Dnase處理，并沒有再做純化，直接凍存-70。以Nuclease-Free Water做Blank用NanoDrop2000測得RNA濃度為14015.9ng/μl，260/280是1.86,260/230是2.17。這個濃度是不是高得不正常��？為什么會這么高呢? 還有，我在20μf反應l體系中加了2μl該RNA，進行探針法一步法RT-PCR，所做的不加反轉(zhuǎn)錄酶混合物的對照也在25個循環(huán)后出現(xiàn)了擴增曲線，這是不是說明我的RNA模板中還含有殘余DNA呢？我如果要用體外轉(zhuǎn)錄的RNA做標準品的話，是不是必須不能含有一丁點DNA呢？ |
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2樓2013-07-15 15:59:31
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