 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 5 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 1977 | 回復: 15 | ||||
| 當前只顯示滿足指定條件的回帖，點擊這里查看本話題的所有回帖 | ||||
[求助]
芒果蔗糖轉化酶的純化遇到了問題 求高人指點
|
||||
|
我在純化芒果中的蔗糖轉化酶， 1、首先用50mM的Tris-Hcl pH7.1的緩沖液（緩沖液中加了EDTA-Na2,苯甲脒、DTT、PMSF等一些列保護劑）提取的，硫酸銨沉淀后用同樣的緩沖液透析。 2、然后過DEAE-Sepharose柱，用含有0~0.5M的NaCl緩沖液梯度洗脫，流速0.6ml/min，高酶活組分在0.3~0.35M的NaCl濃度被洗脫下來。 3、然后濃縮有活性組分過Sephacryl-300 HR柱，柱子是1.5cm*100cm規(guī)格的，洗脫用的緩沖液是含有0.1M NaCl的 50mM Tris-HCl緩沖液，流速為0.3ml/min，然后收集活性組分濃縮電泳分析發(fā)現與過Sephacryl-300 HR柱之前沒有什么區(qū)別，只是有的條帶更濃了，雜蛋白還是很多。注：過柱之前我分別用截留分子量50 K和100 K的超濾離心管進行了試驗，發(fā)現50k的膜能將酶完全截留住，100 K的的膜不能完全將酶截留，如果這樣的話 那酶的分子量應該在150k~300K之間，Sephacryl-300 HR適合分離10—1500K的蛋白，因此選擇了Sephacryl-300 HR。 4、下面是電泳圖 從左到右標號為1的是過DEAE-Sepharose之前的，標2的為過DEAE-Sepharose之后的活性組分；標3的是過Sephacryl-300 HR的活性組分。2和3 是在收集到了活性組分進行濃縮后進行電泳分析的。 大家?guī)椭纯?分析下是什么原因導致分離效果不好的? 如果這一步不能實現純化，應該繼續(xù)采取什么手段呢？個人覺得可能是由于： 1、過Sephacryl-300時流速過快 2、過Sephacryl-300時緩沖液體系或pH 不合適 3、Sephacryl-300這種填料不適合這種酶的分離，應該換哪種填料呢？ 電泳3.png [ Last edited by 小李愛學習 on 2013-6-27 at 22:14 ] |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 蛋白質生物學實驗經驗 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設計，解析生命機制的重要載體
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經有198人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經有0人回復
-
納米粒度分析
已經有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經有0人回復
-
留學--博士招生
已經有16人回復
-
化學工程，本211，求調劑，ab區(qū)不限
已經有4人回復
-
邵陽學院食品與化學工程學院碩士調劑
已經有0人回復
» 本主題相關商家推薦: (我也要在這里推廣)
» 本主題相關價值貼推薦，對您同樣有幫助:
3樓2013-06-28 09:24:24
凌波麗
專家顧問 (知名作家)
-
專家經驗: +218 - MolEPI: 44
- 應助: 397 (碩士)
- 貴賓: 0.044
- 金幣: 2118.9
- 散金: 10
- 紅花: 208
- 帖子: 5633
- 在線: 571.6小時
- 蟲號: 1766465
- 注冊: 2012-04-19
- 性別: MM
- 專業(yè): 生物大分子結構與功能
- 管轄: 生物科學綜合
【答案】應助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應助指數 +1
小李愛學習: 金幣+100, ★★★很有幫助 2013-06-28 09:24:43
1949stone: 一次收這么多金幣 被系統(tǒng)懷疑金幣轉移了啊 ！ 2013-06-28 09:34:36
1949stone: 記得繼續(xù)會人家的問題啊 嘿嘿 2013-06-28 09:35:11
小丹木木: 金幣-49, 應助指數+1, 呵呵，樓主想要回多給的BB,所以把多給的扣回去了啊 2013-06-28 10:08:35
感謝參與，應助指數 +1
小李愛學習: 金幣+100, ★★★很有幫助 2013-06-28 09:24:43
1949stone: 一次收這么多金幣 被系統(tǒng)懷疑金幣轉移了啊 ！ 2013-06-28 09:34:36
1949stone: 記得繼續(xù)會人家的問題啊 嘿嘿 2013-06-28 09:35:11
小丹木木: 金幣-49, 應助指數+1, 呵呵，樓主想要回多給的BB,所以把多給的扣回去了啊 2013-06-28 10:08:35
| 今天太晚了，我改日回答你，提示兩點：1.實在不行用目的蛋白質送到生物技術公司制備出單克隆抗體（約3個月時間)，然后親和層析，制備單抗時你先做別的實驗；2.到文獻中搜索一下同源蛋白質的別人的提純方法。 |
2樓2013-06-28 02:46:46
1949stone
榮譽版主 (知名作家)
海納百川
- MolEPI: 4
- 應助: 95 (初中生)
- 貴賓: 2.38
- 金幣: 2633.7
- 散金: 3394
- 紅花: 177
- 沙發(fā): 8
- 帖子: 9831
- 在線: 2692.8小時
- 蟲號: 765987
- 注冊: 2009-05-08
- 性別: GG
- 專業(yè): 藥物分析
- 管轄: 分子生物
6樓2013-06-28 12:32:16
7樓2013-06-28 13:02:22
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 材料科學與工程求調劑 +5 | 深V宿舍吧 2026-03-29 | 5/250 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 275求調劑 +13 | Micky11223 2026-03-25 | 18/900 |
|
|
|
[考研] 求調劑，一志愿 南京航空航天大學 ，080500材料科學與工程學碩，總分289分 +7 | @taotao 2026-03-29 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 321求調劑 +7 | 璞玉~~ 2026-03-25 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿哈爾濱工業(yè)大學材料與化工方向336分 +9 | 辰沐5211314 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 一志愿華北電力大學能動專碩，293，求調劑 +3 | 15537177284 2026-03-23 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 藥學105500求調劑 +3 | Ssun。。 2026-03-28 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工調劑 +10 | A-哆啦Z夢 2026-03-23 | 16/800 |
|
|
|
[考研] 308求調劑 +7 | 墨墨漠 2026-03-25 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 08開頭275求調劑 +4 | 拉誰不重要 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 298調劑 +3 | jiyingjie123 2026-03-27 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 292求調劑 +4 | 求求了收下我吧?/a> 2026-03-26 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 336材料求調劑 +7 | 陳瀅瑩 2026-03-26 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 081700 調劑 267分 +11 | 迷人的哈哈 2026-03-23 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 332求調劑 +6 | 032500 2026-03-25 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 334分 一志愿武理-080500 材料求調劑 +4 | 李李不服輸 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 302求調劑 +4 | 錦衣衛(wèi)藤椒 2026-03-25 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 0854人工智能方向招收調劑 +4 | 章小魚567 2026-03-24 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 上海電力大學材料防護與新材料重點實驗室招收調劑研究生（材料、化學、電化學，環(huán)境） +4 | 我愛學電池 2026-03-23 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 求調劑 +6 | 研研，接電話 2026-03-24 | 7/350 |
|