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北京石油化工學(xué)院2026年研究生招生接收調(diào)劑公告

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sstefsun0630

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[求助] 關(guān)于RNA提取的幾個(gè)問題~~~

最近在RNA的提取過程中遇到了幾個(gè)問題，希望得到各位大蝦的幫助~~~
1.我提取的RNA電泳出來有18s,28s兩條帶。但是用分光測出來的結(jié)果260/280只有1.5左右，這是個(gè)神馬情況呢？
2.我之前提取的RNA260/280有2.1左右，RNA含量差不多是300 ng/uL左右�？墒乾F(xiàn)在提取的RNA260/280一般都是1.7~1.8，含量只有90 ng/uL左右。RNA提取過程中能注意的我都注意了。實(shí)在是不知道為什么會(huì)這樣。

我提取的是植物植株的RNA，用的是天根的離心柱式植物總RNA提取試劑盒~~~

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有關(guān)RNA提取的問題已經(jīng)有12人回復(fù)

1樓 2013-07-09 09:19:46

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sstefsun0630

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3樓: Originally posted by zhouking8758 at 2013-07-09 11:54:44
電泳跑膠結(jié)果估算值與檢測值相差大嗎？
A260/A280的結(jié)果除了與RNA或DNA純度有關(guān)，還與提取溶液中的蛋白以及其他有機(jī)物等均有關(guān)。
不知道樓主洗脫液用的是什么？
另外，柱子的質(zhì)量對(duì)比值也有一定的影響。

額~~~腦抽了，最后一個(gè)問題當(dāng)我沒問~~~

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8樓2013-07-09 21:37:22

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zhouking8758

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1949stone: 回帖置頂 2013-07-10 08:37:56
sstefsun0630: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-07-12 14:28:27

電泳跑膠結(jié)果估算值與檢測值相差大嗎？
A260/A280的結(jié)果除了與RNA或DNA純度有關(guān)，還與提取溶液中的蛋白以及其他有機(jī)物等均有關(guān)。
不知道樓主洗脫液用的是什么？
另外，柱子的質(zhì)量對(duì)比值也有一定的影響。

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3樓2013-07-09 11:54:44

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cicelyzh

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sstefsun0630: 金幣+5, ★★★很有幫助 2013-07-12 14:29:20

A260/280偏低一般是蛋白雜質(zhì)污染造成的。一般用盒子提主要注意提取樣品的生物量不宜太多或者太少，否則影響破碎效果和純度。提植物的RNA不要用太老的樣品。

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4樓2013-07-09 12:11:21

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各位大神，求指點(diǎn)~~~

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2樓2013-07-09 11:31:18

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蛋白質(zhì)的話，我電泳的點(diǎn)樣孔在紫外下看不到熒光~~應(yīng)該是沒有太多蛋白質(zhì)的雜質(zhì)吧~~~
洗脫液因?yàn)橛玫脑噭┖校唧w的成分不太清楚是什么。
另外，弱弱的問一下，電泳跑膠的估算值是怎么個(gè)估算法呢？還有柱子的質(zhì)量對(duì)比值是什么呢？

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5樓2013-07-09 14:48:55

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4樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-07-09 12:11:21
A260/280偏低一般是蛋白雜質(zhì)污染造成的。一般用盒子提主要注意提取樣品的生物量不宜太多或者太少，否則影響破碎效果和純度。提植物的RNA不要用太老的樣品。

我的植物還是比較年輕的小苗~~~前幾天有一次我提的RNA不論是A260/280還是電泳都特別好（取樣品量和以前沒什么區(qū)別）。跟以前唯一不同的是漂洗液是現(xiàn)用現(xiàn)配的，不知道跟這個(gè)有關(guān)系沒有~不過這幾次又恢復(fù)老樣子了。愁~~~

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6樓2013-07-09 15:07:20

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grape_vine

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1949stone: 回帖置頂 2013-07-10 08:37:44

天根的試劑盒,出問題比較多的有兩個(gè)地方,一個(gè)是裂解液,還有一個(gè)是酚.如果裂解液你每次都是整瓶加熱的話,可能用了幾次以后,再用效果就不好了.另外就是那瓶酚,有的時(shí)候他們的飽和酚感覺上面的水封做的不好,用著用著就不好用了.你可以換個(gè)新的試劑盒看看.
另外,一般的洗脫液就是TE, tris(10mm)和EDTA(1mm),你要是擔(dān)心這個(gè)有問題,自己用RNase free水洗脫液可以.

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7樓2013-07-09 15:25:20

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7樓: Originally posted by grape_vine at 2013-07-09 15:25:20
天根的試劑盒,出問題比較多的有兩個(gè)地方,一個(gè)是裂解液,還有一個(gè)是酚.如果裂解液你每次都是整瓶加熱的話,可能用了幾次以后,再用效果就不好了.另外就是那瓶酚,有的時(shí)候他們的飽和酚感覺上面的水封做的不好,用著用著就 ...

加裂解液后我都沒有加熱過，都是劇烈搖晃然后就直接離心了。實(shí)驗(yàn)室的其他同學(xué)都是這么做的，也沒有出現(xiàn)我這個(gè)問題~唉~~我這個(gè)試劑盒沒有酚。

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9樓2013-07-09 21:49:42

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10樓2013-07-09 21:50:12

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