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浩子jerry金蟲 (正式寫手)
(ˇˍˇ） 想～
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[求助]
跑western，我的片子壓不出來，是空白的，為啥？
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各位大神啊，SOS啊，小弟剛學跑蛋白，按正常的步驟一步一步來，麗春紅染色有條帶，還是兩邊都加了marker，用抗體孵育后，加ECL，但是后面壓片子時，沒有條帶，一點也沒有，請問下有哪些原因呢？有兩個膜，一抗是Akt，另一個是Gsk-3，二抗是兔抗，結果片子沒條帶，額，不知咋了？？ 之后洗凈，用GAPDH孵育，壓片子也沒有，不知哪一步弄錯了，哎！ 求助啊，謝謝�。�  |
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浩子jerry
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3樓2013-07-10 08:44:19
cicelyzh
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更詳細的解答。 2013-07-10 08:15:00
1949stone: 金幣+1, 好久不做wb 學習下 2013-07-10 08:40:32
浩子jerry: 金幣+5, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2013-07-12 23:42:41
感謝參與，應助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更詳細的解答。 2013-07-10 08:15:00
1949stone: 金幣+1, 好久不做wb 學習下 2013-07-10 08:40:32
浩子jerry: 金幣+5, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2013-07-12 23:42:41
| 如果轉膜沒有問題，可能出現(xiàn)在抗體上。確定一下二抗與一抗是否匹配，抗體稀釋倍數(shù)是否合適。二抗偶聯(lián)的是過氧化物酶嗎？ECL熒光在酶作用下的穩(wěn)定時間不是特別長，浸泡后盡快壓片。此外，實驗室是否有其他人做western，可以請教一下操作和經(jīng)驗。 |
2樓2013-07-10 01:03:41
xiwenhui
木蟲 (正式寫手)
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4樓2013-07-10 13:01:48
浩子jerry
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5樓2013-07-10 15:33:34
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