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浩子jerry金蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
(ˇˍˇ） 想～
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[求助]
跑western，我的片子壓不出來(lái)，是空白的，為啥？
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各位大神啊，SOS啊，小弟剛學(xué)跑蛋白，按正常的步驟一步一步來(lái)，麗春紅染色有條帶，還是兩邊都加了marker，用抗體孵育后，加ECL，但是后面壓片子時(shí)，沒(méi)有條帶，一點(diǎn)也沒(méi)有，請(qǐng)問(wèn)下有哪些原因呢？有兩個(gè)膜，一抗是Akt，另一個(gè)是Gsk-3，二抗是兔抗，結(jié)果片子沒(méi)條帶，額，不知咋了？？ 之后洗凈，用GAPDH孵育，壓片子也沒(méi)有，不知哪一步弄錯(cuò)了，哎！ 求助啊，謝謝��！  |
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xiwenhui
木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)
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4樓2013-07-10 13:01:48
cicelyzh
鐵桿木蟲(chóng) (職業(yè)作家)
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。期待你的精彩和更詳細(xì)的解答。 2013-07-10 08:15:00
1949stone: 金幣+1, 好久不做wb 學(xué)習(xí)下 2013-07-10 08:40:32
浩子jerry: 金幣+5, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2013-07-12 23:42:41
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1949stone: 金幣+1, 好久不做wb 學(xué)習(xí)下 2013-07-10 08:40:32
浩子jerry: 金幣+5, ★★★很有幫助, 謝謝！ 2013-07-12 23:42:41
| 如果轉(zhuǎn)膜沒(méi)有問(wèn)題，可能出現(xiàn)在抗體上。確定一下二抗與一抗是否匹配，抗體稀釋倍數(shù)是否合適。二抗偶聯(lián)的是過(guò)氧化物酶嗎？ECL熒光在酶作用下的穩(wěn)定時(shí)間不是特別長(zhǎng)，浸泡后盡快壓片。此外，實(shí)驗(yàn)室是否有其他人做western，可以請(qǐng)教一下操作和經(jīng)驗(yàn)。 |
2樓2013-07-10 01:03:41
浩子jerry
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3樓2013-07-10 08:44:19
浩子jerry
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5樓2013-07-10 15:33:34
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