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浩子jerry金蟲 (正式寫手)
(ˇˍˇ) 想~
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[求助]
跑western,我的片子壓不出來,是空白的,為啥?
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各位大神啊,SOS啊,小弟剛學(xué)跑蛋白,按正常的步驟一步一步來,麗春紅染色有條帶,還是兩邊都加了marker,用抗體孵育后,加ECL,但是后面壓片子時,沒有條帶,一點也沒有,請問下有哪些原因呢?有兩個膜,一抗是Akt,另一個是Gsk-3,二抗是兔抗,結(jié)果片子沒條帶,額,不知咋了?? 之后洗凈,用GAPDH孵育,壓片子也沒有,不知哪一步弄錯了,哎! 求助啊,謝謝。 |

金蟲 (正式寫手)
(ˇˍˇ) 想~

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
| 如果轉(zhuǎn)膜沒有問題,可能出現(xiàn)在抗體上。確定一下二抗與一抗是否匹配,抗體稀釋倍數(shù)是否合適。二抗偶聯(lián)的是過氧化物酶嗎?ECL熒光在酶作用下的穩(wěn)定時間不是特別長,浸泡后盡快壓片。此外,實驗室是否有其他人做western,可以請教一下操作和經(jīng)驗。 |
金蟲 (正式寫手)
(ˇˍˇ) 想~

木蟲 (正式寫手)
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