 |
 |
 |
 |
 |
 |
||
 |
 |
 |
 |
 |
| 17 | 1/1 | 返回列表 |
| 查看: 9914 | 回復: 16 | ||||
[交流]
質(zhì)粒上定點突變不用DpnI酶消化的后果
|
||||
本人在已構(gòu)建成功的重組質(zhì)粒上定點突變，但沒有使用消化酶，直接轉(zhuǎn)化，有轉(zhuǎn)化子，提質(zhì)粒，測序，卻發(fā)現(xiàn)在設(shè)計好的位點沒有發(fā)生突變，想交流一下，是否跟消化酶有關(guān)，想知道整個詳細的PCR過程和轉(zhuǎn)化后在質(zhì)粒模板和PCR產(chǎn)物在宿主菌中復制克隆的效率。謝謝啦~~~ |
回復此樓» 收錄本帖的淘帖專輯推薦
 分子生化實驗經(jīng)驗積累 |
» 猜你喜歡
不合理蛙科研實驗中的趣事：實驗器材的 “烏龍”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗中的趣事：和實驗材料的 “斗智斗勇”
已經(jīng)有0人回復
-
化學工程及工業(yè)化學論文潤色/翻譯怎么收費?
已經(jīng)有169人回復
-
蛋白質(zhì)檢測：精準分析，解鎖生物分子的密碼
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之小鼠實驗：嚴謹設(shè)計，解析生命機制的重要載體
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之重金屬檢測：精準篩查，守護健康與環(huán)境的防線
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“蛙測重金屬我背鍋三千”
已經(jīng)有0人回復
-
不合理蛙科研實驗之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI”
已經(jīng)有0人回復
-
納米粒度分析
已經(jīng)有3人回復
-
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標南京
已經(jīng)有0人回復
» 本主題相關(guān)價值貼推薦，對您同樣有幫助:
- DpnI 酶消化不了模板，求解。
已經(jīng)有9人回復
- 【求助/交流】定點突變-DpnI消化
已經(jīng)有12人回復
» 搶金幣啦！回帖就可以得到:
-
青島高校2026招生碩士研究生
+5/860
-
電力全國重點實驗室雙一流A類長江學者團隊招2026年全日制博士1名（4月3日截止）
+2/110
-
南京醫(yī)科大學生殖醫(yī)學與子代健康國重實驗室-董飛宏課題組-學術(shù)碩士招生
+1/95
-
天津工業(yè)大學航空航天博士招生
+1/33
-
紡織科學與工程、材料化工方向招收研究生
+1/28
-
山西大學資源與環(huán)境工程研究所化工分離/環(huán)境功能材料小組招收2026年博士生
+2/20
-
中國民航飛行學院先進連接團隊招收航空宇航、航空機械專業(yè)碩士研究生（學碩專碩均可）
+1/20
-
26年博士自薦
+1/17
-
醫(yī)學327分專碩調(diào)劑
+1/16
-
福建師范大學化學與材料學院杜克釗團隊博士/碩士招生
+1/14
-
南開大學羅景山教授課題組招收2026年入學博士生（光/電催化方向）
+2/14
-
河南大學龔和貴教授2026年博士研究生招生
+1/9
-
求調(diào)劑｜一志愿廣東工業(yè)大學控制工程｜總分355｜本科電氣｜有項目/競賽/論文經(jīng)歷
+1/9
-
青島科技大學可持續(xù)高分子團隊 考研招生
+1/7
-
2026考研的同學，分數(shù)不夠？想調(diào)劑上岸的同學，來看
+1/5
-
國家杰青低維材料與器件力學團隊2026年招收博士研究生
+1/3
-
深圳大學蔡興科課題組博士后及研究助理招聘
+1/2
-
339求調(diào)劑
+1/1
-
【2026年春季補錄】廈門大學田中群院士/易駿教授納米光子學團隊招收2026年入學博士生
+1/1
-
中國質(zhì)量檢驗檢測科學研究院招收聯(lián)合培養(yǎng)研究生
+1/1
2樓2013-07-17 09:48:30
gyesang
榮譽版主 (著名寫手)
-
專家經(jīng)驗: +24 - MolEPI: 31
- 應助: 599 (博士)
- 貴賓: 2.689
- 金幣: 24334.9
- 帖子: 2327
- 在線: 623.1小時
- 蟲號: 849017
★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-07-21 08:12:07
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+2, 鼓勵交流 2013-07-21 08:12:07
|
這是有的啊，模板質(zhì)粒帶有甲基化（質(zhì)粒需從dam,dcm非缺陷型的大腸桿菌菌株中提取，比如DH5a），PCR產(chǎn)生的DNA鏈不帶甲基化，DpnI的一個特性就是要其識別位點被甲基化后其才能切割DNA，這樣就把環(huán)狀DNA鏈和新和成的PCR產(chǎn)物鏈給區(qū)分開了，其只降解質(zhì)粒DNA鏈，不降解PCR產(chǎn)物鏈,經(jīng)過轉(zhuǎn)化，PCR產(chǎn)物鏈經(jīng)過修復形成環(huán)狀，從而完成突變 |
10樓2013-07-18 23:07:07
gyesang
榮譽版主 (著名寫手)
-
專家經(jīng)驗: +24 - MolEPI: 31
- 應助: 599 (博士)
- 貴賓: 2.689
- 金幣: 24334.9
- 帖子: 2327
- 在線: 623.1小時
- 蟲號: 849017
11樓2013-07-18 23:10:06
13樓2013-10-28 15:13:57
3樓2013-07-17 10:06:55
4樓2013-07-17 10:12:17
5樓2013-07-17 10:26:10
6樓2013-07-17 10:34:13
7樓2013-07-17 10:36:25
8樓2013-07-17 11:06:30
9樓2013-07-17 11:46:14
12樓2013-10-04 11:12:48
★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
小木蟲: 金幣+0.5, 給個紅包，謝謝回帖
|
體內(nèi)降解：原始質(zhì)粒模板可以被能降解甲基化質(zhì)粒的大腸桿菌（DMT）降解， 而去甲基化擴增產(chǎn)物不會被降解。 體外降解：甲基化模板可被Dpn1識別、切割，而去甲基化擴增產(chǎn)物不會被降解。 篩選依據(jù)：來自大腸桿菌的質(zhì)粒99％發(fā)生甲基化；PCR產(chǎn)物是去甲基化的產(chǎn)物。 問題是：PCR產(chǎn)物在體內(nèi)甲基化之后不會被DMT降解嗎？？還有原始質(zhì)粒就是甲基化的啊 在體內(nèi)不會被降解嗎？其實是一個問題，搞不懂�。�！還有，什么是DMT��？ |
14樓2014-05-20 13:38:26
15樓2014-08-09 16:15:34
16樓2014-08-09 18:19:29
17樓2014-08-12 15:28:42
相關(guān)版塊跳轉(zhuǎn)
我要訂閱樓主 echochen1017 的主題更新
| 17 | 1/1 | 返回列表 |
| 最具人氣熱帖推薦 [查看全部] | 作者 | 回/看 | 最后發(fā)表 | |
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 【0703化學調(diào)劑】-一志愿華中師范大學-六級475 +6 | Becho359 2026-03-11 | 6/300 |
|
|---|---|---|---|---|
|
[考研] 304求調(diào)劑 +11 | 小熊joy 2026-03-14 | 12/600 |
|
|
|
[考研] 考研求調(diào)劑 +3 | 橘頌. 2026-03-17 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 301求調(diào)劑 +4 | A_JiXing 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 考研化學學碩調(diào)劑，一志愿985 +4 | 張vvvv 2026-03-15 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 085600材料與化工求調(diào)劑 +5 | 緒幸與子 2026-03-17 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +6 | 孔志浩 2026-03-12 | 11/550 |
|
|
|
[考研] 一志愿南京大學，080500材料科學與工程，調(diào)劑 +4 | Jy? 2026-03-16 | 4/200 |
|
|
|
[考研] 283求調(diào)劑 +10 | 小樓。 2026-03-12 | 14/700 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學學碩310找調(diào)劑 +5 | d如愿上岸 2026-03-12 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 一志愿華中師范071000，325求調(diào)劑 +6 | RuitingC 2026-03-12 | 6/300 |
|
|
|
[考研] 材料與化工一志愿南昌大學327求調(diào)劑推薦 +7 | Ncdx123456 2026-03-13 | 8/400 |
|
|
|
[考研] 求老師收留調(diào)劑 +4 | jiang姜66 2026-03-14 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 26調(diào)劑/材料/英一數(shù)二/總分289/已過A區(qū)線 +6 | 步川酷紫123 2026-03-13 | 6/300 |
|
|
|
[碩博家園] 085600 260分求調(diào)劑 +3 | 天空還下雨么 2026-03-13 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 求調(diào)劑 +5 | 一定有學上- 2026-03-12 | 5/250 |
|
|
|
[考研] 310求調(diào)劑 +3 | 【上上簽】 2026-03-11 | 3/150 |
|
|
|
[考研] 一志愿211化學學碩310分求調(diào)劑 +8 | 努力奮斗112 2026-03-12 | 9/450 |
|
|
|
[考研] 290求調(diào)劑 +7 | ADT 2026-03-12 | 7/350 |
|
|
|
[考研] 070303一志愿西北大學學碩310找調(diào)劑 +3 | d如愿上岸 2026-03-13 | 3/150 |
|