當(dāng)前只顯示滿足指定條件的回帖，點(diǎn)擊這里查看本話題的所有回帖

hyc_charles

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 611.7
帖子: 77
在線: 13.8小時(shí)
蟲號(hào): 2469166

[交流] 關(guān)于PCR和PAGE膠

這段時(shí)間一直在做分子標(biāo)記，被PCR整的夠嗆，卡在選擴(kuò)這已經(jīng)2個(gè)月了，產(chǎn)物總是時(shí)有時(shí)無，同樣的材料重復(fù)一次，結(jié)果都會(huì)不一樣或者什么都沒有了，換了所有的試劑，換了新設(shè)計(jì)的引物，結(jié)果一樣，真是快崩潰了。
另外就是PAGE膠，跑過的人都知道，這個(gè)也是很熬人的，做一次大半天就耗進(jìn)去了，但擴(kuò)增產(chǎn)物又只能用這個(gè)來檢測(cè)，不然看不清楚，跑膠真是門藝術(shù)，中間的不可控步驟太多，這些都會(huì)造成你的結(jié)果不同。
有沒有經(jīng)驗(yàn)人士，遇到同樣的問題，大家交流交流~
祝大伙實(shí)驗(yàn)順利！！

回復(fù)此樓

» 猜你喜歡

不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之小鼠實(shí)驗(yàn)：嚴(yán)謹(jǐn)設(shè)計(jì)，解析生命機(jī)制的重要載體已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之重金屬檢測(cè)：精準(zhǔn)篩查，守護(hù)健康與環(huán)境的防線已經(jīng)有0人回復(fù)
化學(xué)工程及工業(yè)化學(xué)論文潤(rùn)色/翻譯怎么收費(fèi)? 已經(jīng)有108人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“蛙測(cè)重金屬我背鍋三千” 已經(jīng)有0人回復(fù)
不合理蛙科研實(shí)驗(yàn)之“鼠逃三次我發(fā)三篇SCI” 已經(jīng)有0人回復(fù)
納米粒度分析已經(jīng)有3人回復(fù)
林科院林化所招收材料與化工專業(yè)碩士，坐標(biāo)南京已經(jīng)有0人回復(fù)
留學(xué)--博士招生已經(jīng)有16人回復(fù)
化學(xué)工程，本211，求調(diào)劑，ab區(qū)不限已經(jīng)有4人回復(fù)
邵陽(yáng)學(xué)院食品與化學(xué)工程學(xué)院碩士調(diào)劑已經(jīng)有0人回復(fù)

» 本主題相關(guān)商家推薦: (我也要在這里推廣)

» 本主題相關(guān)價(jià)值貼推薦，對(duì)您同樣有幫助:

DNA非變性PAGE膠回收條帶二次PCR出現(xiàn)問題急！�。� 已經(jīng)有6人回復(fù)
急！PAGE膠回收后做二次PCR，目的條帶變得很小！愁！已經(jīng)有6人回復(fù)
通過梯度PCR摸索的最佳退火溫度，擴(kuò)出來的條帶不太亮，幫忙分析那些引物不可以用已經(jīng)有5人回復(fù)
關(guān)于丙烯酰胺凝膠電泳跑DNA樣品的幾個(gè)問題已經(jīng)有9人回復(fù)
挑單克隆后，菌液PCR檢測(cè)所有條帶都偏小，目的條帶沒有出現(xiàn) 已經(jīng)有9人回復(fù)
4%PAGE（聚丙烯酰胺凝膠電泳）250bp處條帶出現(xiàn)扭曲，求助！已經(jīng)有19人回復(fù)
PCR不出帶，求教已經(jīng)有14人回復(fù)
pcr跑膠圖已經(jīng)有6人回復(fù)
PAGE跑PCR產(chǎn)物總是有問題~~ 已經(jīng)有9人回復(fù)
求助MSP凝膠電泳該如何選擇已經(jīng)有16人回復(fù)
銀染色聚丙烯酰胺凝膠電泳已經(jīng)有13人回復(fù)
SDS-PAGE膠的問題已經(jīng)有9人回復(fù)
pcr 帶好寬啊!苦惱，求助ing! 已經(jīng)有21人回復(fù)
微生物多樣性研究的幾個(gè)問題已經(jīng)有10人回復(fù)
SSR-PCR求助已經(jīng)有21人回復(fù)
關(guān)于切膠回收后有質(zhì)粒污染和拼接PCR涂抹裝條帶的問題，有點(diǎn)長(zhǎng)，呵呵已經(jīng)有13人回復(fù)
如何從PAGE膠及尿素變性PAGE膠回收DNA樣品已經(jīng)有7人回復(fù)
DGGE上樣孔很亮，DNA跑不下來已經(jīng)有12人回復(fù)

» 搶金幣啦！回帖就可以得到:

查看全部散金貼

1樓 2013-07-22 18:50:49

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

hyc_charles

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 611.7
帖子: 77
在線: 13.8小時(shí)
蟲號(hào): 2469166

引用回帖:

2樓: Originally posted by 不卑微的我 at 2013-07-23 09:26:46
我現(xiàn)在也是碰到同樣的問題。之前一直蠻順利，最近選擴(kuò)總是彌散，不知道什么原因。

加油加油，堅(jiān)持頂住，我還真不信我做不出來了！

贊一下

回復(fù)此樓

» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）

不卑微的我

4樓2013-07-23 12:47:05

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

查看全部 9 個(gè)回答

不卑微的我

銀蟲 (初入文壇)

應(yīng)助: 1 (幼兒園)
金幣: 291.9
帖子: 14
在線: 42.3小時(shí)
蟲號(hào): 2504206

★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖

我現(xiàn)在也是碰到同樣的問題。之前一直蠻順利，最近選擴(kuò)總是彌散，不知道什么原因。

贊一下

回復(fù)此樓

2樓2013-07-23 09:26:46

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

liyongliangx

銅蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 24 (小學(xué)生)
金幣: 111.9
帖子: 114
在線: 23.5小時(shí)
蟲號(hào): 2225319

★ ★ ★ ★
小木蟲: 金幣+0.5, 給個(gè)紅包，謝謝回帖
kx444555: 金幣+3, 鼓勵(lì)交流 2013-07-23 11:15:11

我之前也遇到過這樣的問題。有點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)可以和你說說
一，關(guān)于彌散的問題，你首先要確定你的模板沒有問題，可以跑個(gè)膠看一看大小，也可以做個(gè)測(cè)序。然后PCR時(shí)候做個(gè)陰性對(duì)照，排除是不是污染造成的。
二，你要找到模板和引物量的比例，可能是你模板量太多，也可能是引物太多。我比較推薦1ng/UL的模板濃度，引物可以用10uM和5uM都試試。
三，就是你操作的問題，要看你的是什么樣的酶。反應(yīng)體系最好按著說明書上做。注意一點(diǎn)說明書上note 內(nèi)容：比如在冰上配體系，然后等到PCR儀進(jìn)入到變性溫度的時(shí)候再把PCR管放到PCR儀里。

贊一下

回復(fù)此樓

» 本帖已獲得的紅花（最新10朵）

43289899

3樓2013-07-23 10:14:43

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

hyc_charles

金蟲 (小有名氣)

應(yīng)助: 3 (幼兒園)
金幣: 611.7
帖子: 77
在線: 13.8小時(shí)
蟲號(hào): 2469166

引用回帖:

3樓: Originally posted by liyongliangx at 2013-07-23 10:14:43
我之前也遇到過這樣的問題。有點(diǎn)經(jīng)驗(yàn)可以和你說說
一，關(guān)于彌散的問題，你首先要確定你的模板沒有問題，可以跑個(gè)膠看一看大小，也可以做個(gè)測(cè)序。然后PCR時(shí)候做個(gè)陰性對(duì)照，排除是不是污染造成的。
二，你要找到模 ...

謝謝，前面兩步我都做了驗(yàn)證，引物也是濃度10μM的，我用的TAQ酶是國(guó)產(chǎn)的，沒有說明書的說- -，takara的酶倒是按照說明書的做的，但是現(xiàn)在用完了。

贊一下

回復(fù)此樓

5樓2013-07-23 12:50:10

已閱回復(fù)此樓關(guān)注TA 給TA發(fā)消息送TA紅花 TA的回帖

最具人氣熱帖推薦 [查看全部]	作者	回/看	最后發(fā)表

[考研] 279求調(diào)劑 +4	蝶舞輕繞 2026-03-29	4/200	2026-03-29 09:45 by laoshidan
[考研] 081200-11408-276學(xué)碩求調(diào)劑 +6	崔wj 2026-03-26	6/300	2026-03-29 01:11 by hanserlol
[考研] 一志愿華理，數(shù)一英一285求A區(qū)調(diào)劑 +8	AZMK 2026-03-25	12/600	2026-03-28 18:15 by AZMK
[考研] 一志愿華北電力大學(xué)能動(dòng)專碩，293，求調(diào)劑 +3	15537177284 2026-03-23	5/250	2026-03-28 16:11 by xxxsssccc
[考研] 求化學(xué)調(diào)劑 +4	wulanna 2026-03-28	4/200	2026-03-28 13:37 by 唐沐兒
[考研] 藥學(xué)105500求調(diào)劑 +3	Ssun。。 2026-03-28	3/150	2026-03-28 11:24 by lxf170613
[考研] 一志愿上海理工能源動(dòng)力（085800）310分求調(diào)劑 +3	zhangmingc 2026-03-27	4/200	2026-03-27 19:01 by 給你你注意休息
[考研] 一志愿鄭大085600，310分求調(diào)劑 +5	李瀟可 2026-03-26	5/250	2026-03-27 11:14 by 不吃魚的貓
[碩博家園] 北京林業(yè)大學(xué)碩導(dǎo)招生廣告 +6	kongweilin 2026-03-26	8/400	2026-03-27 10:18 by FF_16
[考研] 一志愿陜師大生物學(xué)071000，298分，求調(diào)劑 +5	SYA！ 2026-03-23	5/250	2026-03-27 09:29 by 不吃魚的貓
[考研] 321求調(diào)劑 +6	wasdssaa 2026-03-26	6/300	2026-03-26 20:57 by sanrepian
[考研] 352求調(diào)劑 +4	大米飯！ 2026-03-22	4/200	2026-03-26 16:40 by 不吃魚的貓
[考研] 化學(xué)調(diào)劑一志愿上海交通大學(xué)336分-本科上海211 +4	小魚愛有機(jī) 2026-03-25	4/200	2026-03-26 10:19 by aa331100
[考研] 一志愿南航 335分 \| 0856材料化工 \| GPA 4.07 \| 有科研經(jīng)歷 +6	cccchenso 2026-03-23	6/300	2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 考研一志愿蘇州大學(xué)初始315（英一）求調(diào)劑 +3	sbdksD 2026-03-24	4/200	2026-03-25 18:16 by xcjcqu
[考研] 282求調(diào)劑 +3	wcq131415 2026-03-24	3/150	2026-03-25 12:16 by userper
[考研] 一志愿吉林大學(xué)材料與化工303分求調(diào)劑 +4	為學(xué)666 2026-03-24	4/200	2026-03-25 11:27 by BruceLiu320
[考研] 一志愿北化315 求調(diào)劑 +3	akrrain 2026-03-24	3/150	2026-03-24 19:35 by 了了了了。。
[考研] 085404電子信息284分求調(diào)劑 +4	13659058978 2026-03-24	4/200	2026-03-24 12:15 by syl20081243
[考研] 一志愿山東大學(xué)藥學(xué)學(xué)碩求調(diào)劑 +3	開開心心沒煩惱 2026-03-23	4/200	2026-03-24 00:06 by 開開心心沒煩惱