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努力超人新蟲(chóng) (初入文壇)
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[交流]
苯丙氨酸解氨酶活性測(cè)定的一些問(wèn)題 已有8人參與
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本人在測(cè)定苯丙氨酸解氨酶時(shí)，不知道為什么分光光度計(jì)的讀書(shū)不停地跳動(dòng)，總之不能停留在一個(gè)穩(wěn)定讀數(shù)上，求哪位高人指點(diǎn)一下，多謝。。。我的實(shí)驗(yàn)方法是： PAL的提取與活性的測(cè)定 按照Lister等的方法[19]并略有改進(jìn). 0.5 g甘薯材料加入5 mL的提取液[0•2 M硼酸鹽緩沖液(pH8.8), 0.018 Mβ-巰基乙醇], 0.1 g PVPP(以去除酚類(lèi)物質(zhì)對(duì)顏色的干擾),加少量石英砂,于-20℃預(yù)冷的研缽中冰浴研磨, 4層紗布過(guò)濾.濾液經(jīng)4℃, 15 000 g離心20 min,取上清液作為粗酶液,用于PAL活性測(cè)定. 取1 mL粗酶液加2 mL蒸餾水再加1 mL反應(yīng)底物(0•02 M的L-苯丙氨酸),對(duì)照不加底物,加1mL蒸餾水. 34℃恒溫水浴30 min, 加0.5 mL 35%的三氯乙酸(TCA)終止反應(yīng). 12 000 g離心10 min去除變性蛋白,于290 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度. 以1 mL反應(yīng)液每小時(shí)在290 nm處吸光度變化0.01為1個(gè)酶活單位, 用U表示 |
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