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我有一個(gè)關(guān)于無(wú)菌操作的疑問(wèn)! 已有4人參與
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這半個(gè)月一直在做提細(xì)菌DNA,順便進(jìn)行單菌落PCR的實(shí)驗(yàn)。 我覺(jué)得很奇怪的就是如果我在挑取單菌落至液體培養(yǎng)基內(nèi)進(jìn)行搖床培養(yǎng),我怎么才能證明我操作過(guò)程中未染雜菌,每次培養(yǎng)在小管子里,直接觀察起來(lái)差別好大,有的覺(jué)得整個(gè)液體渾濁度較為均勻,有的就是均勻,但是液體上面會(huì)有一層膜,還有的就是上面有一部分菌靠近液體上層,下面就還有部分菌沉淀,中間部分不怎么渾濁。總覺(jué)得是污染了醋酸桿菌。因?yàn)榫N為芽孢桿菌,試過(guò)進(jìn)行芽孢染色鏡檢,效果卻很不理想,都是桿菌,而且桿狀有長(zhǎng)有短,老師說(shuō)在液體培養(yǎng)基的桿菌會(huì)有的長(zhǎng)有的短,有的長(zhǎng)的還可能是短的連一起了,而且只培養(yǎng)差不多15個(gè)小時(shí)左右,芽孢又不多,根本不能辨別是否染菌,如果染菌了,PCR的產(chǎn)物很可能有污染,拿去測(cè)序豈不就是雜菌的序列嗎?測(cè)序又貴,老師又是那種特別節(jié)約的人,真怕浪費(fèi)他錢(qián),結(jié)果測(cè)出來(lái)還是個(gè)錯(cuò)的!等著挨罵! 而且現(xiàn)在老師讓我跟另外一個(gè)老師專(zhuān)門(mén)學(xué)技術(shù),可是那老師根本就不怎么教我啊,每次都讓我自己做,不懂問(wèn)跟他做實(shí)驗(yàn)的學(xué)生,自己慢慢摸索,出了結(jié)果再找他。結(jié)果出了結(jié)果找他,他讓我自己寄去上海,一個(gè)禮拜之后他告訴我,溫度太高沒(méi)測(cè)出來(lái),讓我再做一次,我繼續(xù)做了然后問(wèn)他要不要用冰袋什么的,他卻又說(shuō)不用,那溫度不還是會(huì)很高啊,F(xiàn)在正在等著第二次的結(jié)果,多說(shuō)都是淚! |
至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
金蟲(chóng) (小有名氣)
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拿搖出來(lái)的菌液涂個(gè)平板,看看是否有雜菌。如果沒(méi)有的話(huà),單就提DNA、PCR過(guò)程中,空氣中的雜菌是不足以對(duì)PCR結(jié)果帶來(lái)影響的。 另外,樓主是做微生物的,應(yīng)該對(duì)自己的無(wú)菌操作技術(shù)有自信啊,不能老是擔(dān)心有污染。一般來(lái)說(shuō),只要操作規(guī)范,不會(huì)染菌的。另外,在保證規(guī)范的前提下,盡可能速度快一下,天下武功唯快不破,放到做實(shí)驗(yàn)上也是一樣的。 |

木蟲(chóng) (小有名氣)

至尊木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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