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26號(hào)新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
srap引物篩選
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俺是這個(gè)月才開(kāi)始做分子實(shí)驗(yàn)的，畢業(yè)論文就是做遺傳多樣性。對(duì)于srap引物篩選的流程不是很清楚，也請(qǐng)教過(guò)一些師兄師姐，意見(jiàn)不一。（1）有的說(shuō)可以先找一個(gè)固定的pcr體系來(lái)篩選幾對(duì)引物，篩選出較好的引物后，利用這幾對(duì)引物來(lái)重新篩選出一個(gè)很好的pcr體系，利用完善的pcr體系再去篩選500多對(duì)引物。（2）先用一對(duì)或者兩對(duì)引物來(lái)設(shè)計(jì)篩選完善的pcr體系，再利用這個(gè)體系來(lái)篩選500多對(duì)引物。 實(shí)踐出真知，俺就用了第一種方法，同一份DNA，找了一個(gè)近緣科的pcr體系，用了5對(duì)引物，但是只有一對(duì)引物出現(xiàn)條帶，覺(jué)得有點(diǎn)郁悶，究竟是什么原因呢？是引物的問(wèn)題？還是pcr體系的問(wèn)題？還是DNA樣本有問(wèn)題？srap引物不是通用引物麼，應(yīng)該5對(duì)都可以p出來(lái)一點(diǎn)點(diǎn)吧，就是什么都沒(méi)有，為什么呢？ 另外，請(qǐng)問(wèn)各位大蝦高手，俺看到有文獻(xiàn)是用ISSR來(lái)做俺的那個(gè)植物的，請(qǐng)問(wèn)，俺用srap引物的話，pcr體系跟其一樣有木有問(wèn)題呢？因?yàn)橐锊灰粯�，退火溫度也就不一樣了�? |
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