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xianlu銅蟲(chóng) (小有名氣)
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[求助]
上ODS開(kāi)放柱如何操作
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歷經(jīng)3次硅膠柱上下來(lái)的一個(gè)餾分（合并了23管），量很多，極性較大（有一定的極性跨度），因硅膠板顯示正相再分離的話效果不理想，所以想上反相柱再分分，用的是自己裝的ODS開(kāi)放柱，這里想請(qǐng)教： 1、上樣時(shí)直接將樣品混懸著上到柱體上面嗎？這樣的話我有2點(diǎn)擔(dān)心： （1）樣品中混有的洗脫不下來(lái)的成分（即不溶性成分，怎么洗脫也洗脫不下來(lái)，甚至是灰塵）最終會(huì)污染柱子。 （2）樣品有一定粘性，會(huì)堵塞柱子。 2、上樣時(shí)將樣品用甲醇溶解后再上樣嗎？這樣的話我有點(diǎn)擔(dān)心： （1）樣品難以用少量溶劑溶解（無(wú)論加熱、超聲等處理），所以樣液體積很大，極不利于分離。 因?yàn)闃悠返某煞謽O性還有一定跨度，ODS薄層板顯示有7-9個(gè)點(diǎn)，且樣品總量較多，我只是想通過(guò)此次ODS柱分離，將樣品進(jìn)一步砍段，有幸的話能拿到一兩個(gè)單體最好。但操作起來(lái)實(shí)在是讓我為難，真正請(qǐng)教各位，尤其是親自做過(guò)ODS開(kāi)放柱的高手們能指點(diǎn)一二，內(nèi)心無(wú)比感激！ |
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| 首先，ODS也就是所謂的C18反相柱，價(jià)格應(yīng)該不算便宜的，建議不要浪費(fèi)。上樣的話必然是溶液，不能夠是混懸液或者有固體不容物存在，可采用離心和過(guò)膜的方法去除不溶性成分；這時(shí)溶解樣品的溶劑應(yīng)該不能用純甲醇，不然的話部分樣品直接就被沖下來(lái)了，起不到分離的作用，要用甲醇水溶解樣品（至于比例要看你的流動(dòng)相是什么比例，最好和流動(dòng)相吻合，實(shí)在不行也不能相差太大）。如果樣品極性大的話，用甲醇水應(yīng)該是可以溶得掉。 |
8樓2013-08-18 13:09:53
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| 先點(diǎn)RP-TLC看看 100% MeOH,或者M(jìn)eCN 條件下原點(diǎn)有無(wú)殘留，有很多殘留，就得點(diǎn)4的膜過(guò)一下，再點(diǎn)板看看。如果殘留還是很多就不合適用反相了，如果沒(méi)有其它好的方法，你們實(shí)驗(yàn)室有錢的話也是可以上反相的，過(guò)完柱子以后把柱子上層部分扔掉，下面的可以接著用。 |
3樓2013-08-16 09:51:30
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4樓2013-08-16 10:05:57
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