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xianlu銅蟲 (小有名氣)
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[求助]
上ODS開放柱如何操作
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歷經(jīng)3次硅膠柱上下來的一個餾分（合并了23管），量很多，極性較大（有一定的極性跨度），因硅膠板顯示正相再分離的話效果不理想，所以想上反相柱再分分，用的是自己裝的ODS開放柱，這里想請教： 1、上樣時直接將樣品混懸著上到柱體上面嗎？這樣的話我有2點擔(dān)心： （1）樣品中混有的洗脫不下來的成分（即不溶性成分，怎么洗脫也洗脫不下來，甚至是灰塵）最終會污染柱子。 （2）樣品有一定粘性，會堵塞柱子。 2、上樣時將樣品用甲醇溶解后再上樣嗎？這樣的話我有點擔(dān)心： （1）樣品難以用少量溶劑溶解（無論加熱、超聲等處理），所以樣液體積很大，極不利于分離。 因為樣品的成分極性還有一定跨度，ODS薄層板顯示有7-9個點，且樣品總量較多，我只是想通過此次ODS柱分離，將樣品進(jìn)一步砍段，有幸的話能拿到一兩個單體最好。但操作起來實在是讓我為難，真正請教各位，尤其是親自做過ODS開放柱的高手們能指點一二，內(nèi)心無比感激！ |
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| 首先，ODS也就是所謂的C18反相柱，價格應(yīng)該不算便宜的，建議不要浪費。上樣的話必然是溶液，不能夠是混懸液或者有固體不容物存在，可采用離心和過膜的方法去除不溶性成分；這時溶解樣品的溶劑應(yīng)該不能用純甲醇，不然的話部分樣品直接就被沖下來了，起不到分離的作用，要用甲醇水溶解樣品（至于比例要看你的流動相是什么比例，最好和流動相吻合，實在不行也不能相差太大）。如果樣品極性大的話，用甲醇水應(yīng)該是可以溶得掉。 |
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樣品溶解，加填料拌勻，柱上層放一張濾紙，將拌勻的樣品上柱。沖洗，搜集餾分就可以了。 9樓2013-08-18 14:19:36
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