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123彭好好新蟲 (初入文壇)
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[求助]
蛋白質(zhì)SDS-丙烯酰胺凝膠電泳 連mark都沒有跑動(dòng)
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我利用不同的溶液提取了蛋清中的幾種不同溶性的蛋白質(zhì)，進(jìn)行了兩次電泳，全都失敗了。所有的點(diǎn)樣及mark都沒有動(dòng)，在63V電壓下跑了2個(gè)多小時(shí)。樣品沒有經(jīng)過透析處理，就直接和樣品緩沖液混合煮沸了5分鐘，就開始點(diǎn)樣了。不知道具體的問題出在哪里，讓我的實(shí)驗(yàn)沒有辦法正常進(jìn)行，希望能有人幫我解答！！ 以下是我所用的膠的配方： 10%分離膠： 水 1.9ml 1.5mol/l Tris-Hcl(PH=8.8) 1ml 30%丙烯酰胺 1.7ml 10%SDS 50μl 10%AP 50μl TEMED 2μL 濃縮膠： 水 1.4ml 1.5mol/l Tris-Hcl(PH=6.8) 0.25ml 30%丙烯酰胺 0.33ml 10%SDS 20μl 10%AP 20μl TEMED 2μL |
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
123彭好好: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-08-20 17:57:59
感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
123彭好好: 金幣+3, ★★★很有幫助 2013-08-20 17:57:59
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我不知道你用的是哪一本書的參考做的，我們用的是下面那本書做的。 你這個(gè)問題我們實(shí)驗(yàn)室也遇到了，查水、電壓、電流等問題都不行，最后檢測(cè)出來是分離膠的濃度不對(duì)，讓很多樣品一直都在濃縮膠里面跑，根本沒法在分離膠里分開。你下去仔細(xì)查下你的分離膠份的配比，我看了下和我們經(jīng)常做出來的比例都不一樣，你下去好好看下，因?yàn)橐灿泻芏鄥⒖紩旧砭褪清e(cuò)誤的，尤其是那些參考文獻(xiàn)的。 配分離膠的比例 參考書 |
6樓2013-08-16 16:58:07
windygo
木蟲 (正式寫手)
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2樓2013-08-16 09:48:13
123彭好好
新蟲 (初入文壇)
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3樓2013-08-16 12:03:56
4樓2013-08-16 16:31:11
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