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freezymind新蟲 (初入文壇)
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[求助]
關(guān)于EDC/NHS 請教各位大牛
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最近在做Fe3O4-Au納米粒子連赫賽汀（一種單克隆抗體藥物）的實驗，試了挺多遍都沒有理想的結(jié)果，各位大牛幫忙看看哪里出問題了： 我的具體步驟： 1、5mg連有PEG-COOH納米粒子溶于5ml水中， 2、加入固體EDC.HCL 220mg(文獻(xiàn)上看來的，50、100mg也都試過） sulfo-NHS 200mg(EDC.HCL/sulfo-NHS 1:1 5:1 10:1也都試過），調(diào)節(jié)PH至5.0左右，室溫卵育15min(30min 1h 2h都試過）， 3、硼砂緩沖液調(diào)節(jié)至7.0（亦曾試過用超濾管去除EDC NHS后調(diào)節(jié)PH）加入赫賽汀室溫2h（室溫過夜、4°2h過夜都試過）。 離心后沒什么沉淀出來啊，文獻(xiàn)上說會有沉淀出現(xiàn)的。請大牛們幫我看看哪里出問題了，感激不盡 |
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| 你看下這個貼：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我覺得你的步驟有問題，一般不這樣做吧。還有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是該NHS的量多投些吧。我最近也在調(diào)研文獻(xiàn)，也要做這種反應(yīng)，希望多交流下吧。 |
3樓2013-08-17 09:36:42
sunshaokai
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1.你這EDC和NHS加的也太多了吧？我們一般都是幾十毫克材料加入幾毫克足以。 2.你可以試一下，將50 mg PEG-COOH納米粒子溶于PBS緩沖溶液中（7.0，中性或偏酸一點活性較好），加入10 mg EDC，10min后加入10 mg NHS（二者摩爾比為1：1即可，稍微多點少點影響不大），反應(yīng)1h后加入赫賽汀。反應(yīng)過夜。 |
5樓2013-08-17 15:00:03
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