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freezymind新蟲 (初入文壇)
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關(guān)于EDC/NHS 請(qǐng)教各位大牛
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最近在做Fe3O4-Au納米粒子連赫賽汀（一種單克隆抗體藥物）的實(shí)驗(yàn)，試了挺多遍都沒有理想的結(jié)果，各位大牛幫忙看看哪里出問題了： 我的具體步驟： 1、5mg連有PEG-COOH納米粒子溶于5ml水中， 2、加入固體EDC.HCL 220mg(文獻(xiàn)上看來(lái)的，50、100mg也都試過） sulfo-NHS 200mg(EDC.HCL/sulfo-NHS 1:1 5:1 10:1也都試過），調(diào)節(jié)PH至5.0左右，室溫卵育15min(30min 1h 2h都試過）， 3、硼砂緩沖液調(diào)節(jié)至7.0（亦曾試過用超濾管去除EDC NHS后調(diào)節(jié)PH）加入赫賽汀室溫2h（室溫過夜、4°2h過夜都試過）。 離心后沒什么沉淀出來(lái)啊，文獻(xiàn)上說會(huì)有沉淀出現(xiàn)的。請(qǐng)大牛們幫我看看哪里出問題了，感激不盡 |
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1.Fe3O4-Au納米離子和PEG-COOH是怎么作用上去的？你用的是SH-PEG-COOH？總之，你要保證COOH是游離在外面的！ 2.你加多巴胺是做什么用呢，因?yàn)樗拇嬖�，肯定�?huì)消耗點(diǎn)一定量的COOH 2.關(guān)于離心沉淀的問題，首先你的PEG-COOH納米粒子離心會(huì)沉淀嗎？如果它不沉淀，那么你接上蛋白，它基本也不會(huì)沉淀；如果你的PEG-COOH納米粒子離心沉淀，接上蛋白后，由于蛋白能增加其水溶性（就向蛋白本省你通過離心是離不下來(lái)的），也有可能不沉淀了。這反而說明蛋白可能接上去了，你就得通過超濾的辦法進(jìn)行提純了。 3.關(guān)于NHS和EDC的用法用量，（1） Nano Lett. 2002, 2, 817–822. （2）Anal. Chem. 2010, 82, 1427-1433. 關(guān)于郵相轉(zhuǎn)水相（1）Adv. Mater. 2011, 23, 4886-4891. （2） Biomaterials. 2012, 33, 2215-2222. 其實(shí)你參照第一個(gè)文獻(xiàn)做法，直接包PVP就可以。 |
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| 你看下這個(gè)貼：http://www.gaoyang168.com/bbs/viewthread.php?tid=5331024 我覺得你的步驟有問題，一般不這樣做吧。還有你的EDC.HCL/sulfo-NHS都是EDC的量高，是不是該NHS的量多投些吧。我最近也在調(diào)研文獻(xiàn)，也要做這種反應(yīng)，希望多交流下吧。 |
3樓2013-08-17 09:36:42
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1.你這EDC和NHS加的也太多了吧？我們一般都是幾十毫克材料加入幾毫克足以。 2.你可以試一下，將50 mg PEG-COOH納米粒子溶于PBS緩沖溶液中（7.0，中性或偏酸一點(diǎn)活性較好），加入10 mg EDC，10min后加入10 mg NHS（二者摩爾比為1：1即可，稍微多點(diǎn)少點(diǎn)影響不大），反應(yīng)1h后加入赫賽汀。反應(yīng)過夜。 |
5樓2013-08-17 15:00:03
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你可以稍微參考下這個(gè)http://wenku.baidu.com/view/ab83173510661ed9ad51f3b4.html 你可以看到從反應(yīng)機(jī)理上看PEG-COOH：EDC：NHS=1：1：1就可以啦。 但是為了要保證轉(zhuǎn)化率，稍微多加一些，但也不至于加到幾百倍吧。 在你的試驗(yàn)中：5mg連有PEG-COOH納米粒子溶于5ml水中，加入固體EDC.HCL 220mg(文獻(xiàn)上看來(lái)的。PEG-COOH：EDC：NHS（摩爾比）應(yīng)該不止1：100：100吧。 我覺得你就用我上面給你回復(fù)的步驟試一下，應(yīng)該沒有問題。  |
7樓2013-08-17 16:53:38
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