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loganfan銀蟲 (正式寫手)
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[求助]
60-100L大腸桿菌發(fā)酵，剛開始涉及經(jīng)驗(yàn)極度匱乏，乞求高手指導(dǎo) 已有2人參與
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| 培養(yǎng)了幾次，但結(jié)果都不太理想，主要是細(xì)菌密度不夠高，搞不清楚是培養(yǎng)基的問題還是控制的問題。 |
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 高密度發(fā)酵 |
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loganfan
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| 自己可以在20-50L發(fā)酵罐中小試下，看看結(jié)果如何，從小試到中試的階段是會(huì)發(fā)生好多變化，如果有時(shí)間的話可以自己做單因素多水平的實(shí)驗(yàn)，關(guān)注下pH、溶氧、攪拌轉(zhuǎn)速、罐壓、通氣量、培養(yǎng)基碳氮比什么的，都會(huì)相應(yīng)的有變化，只能根據(jù)你自己實(shí)際情況摸索，我的建議估計(jì)你也考慮過，所以做實(shí)驗(yàn)吧！ |
3樓2013-08-23 11:26:03
loganfan
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4樓2013-08-23 15:32:29
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5樓2013-08-23 17:18:52
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我們用的基礎(chǔ)培養(yǎng)基是改良的LB培養(yǎng)基，蛋白胨10g/L,酵母浸出粉10g/L，NaCl 5g/L，K2HPO4 5g/L，實(shí)罐滅菌后加入消泡劑（1ml/L）,MgCL2（2g/L）和T溶液（2ml/L）。 種子傳代方式為：?jiǎn)晤w5ml中管培養(yǎng)過夜,傳至60mlLB中8小時(shí)，再傳至750mlLB中8小時(shí)，共6瓶（4500ml）接種至60L基礎(chǔ)培養(yǎng)基中。 培養(yǎng)其實(shí)階段通過控制轉(zhuǎn)速來保證溶氧值保持在25以上，當(dāng)轉(zhuǎn)速達(dá)到400rpm以上，通過通入壓縮空氣或純氧氣來保證溶氧。 培養(yǎng)伊始泵入1000ml 20%葡萄糖，隨后每一小時(shí)補(bǔ)加500ml20%葡萄糖，直至OD600值至10左右（約4h），不再補(bǔ)加葡萄糖，加6mM IPTG誘導(dǎo)，2h。收集菌體。 |
7樓2013-08-28 16:08:01
loganfan
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