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xiaoganghehe銅蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
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[求助]
該怎么理解胞內(nèi)酶和胞外酶？高速離心能讓大腸桿菌細(xì)胞破裂嗎？
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小蟲(chóng)是學(xué)材料的，最近在做關(guān)于大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)，但對(duì)生物一竅不通，因此請(qǐng)教幾個(gè)問(wèn)題。 我的實(shí)驗(yàn)過(guò)程如下：在含乳糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸桿菌，目的是誘導(dǎo)大腸桿菌產(chǎn)生β－半乳糖苷酶。隨后離心（轉(zhuǎn)速5000），用NaCl溶液清洗菌體，再離心（轉(zhuǎn)速7000），然后用PBS溶液清洗菌體沉淀，得到菌體濁液。然后再往菌體濁液中加入ONPG，ONPG是β－半乳糖苷酶的底物。論文上說(shuō)，對(duì)于大腸桿菌，β－半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶。但在離心分離之后，我往菌液中加入ONPG，溶液很快就變成黃色了。 所以很困惑：既然β－半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶，為什么ONPG很快就水解了呢？難道是β－半乳糖苷酶能被大腸桿菌很快釋放到溶液中？或者離心能使大腸桿菌細(xì)胞破裂，β－半乳糖苷酶被釋放出來(lái)？ 希望能聽(tīng)聽(tīng)高人的意見(jiàn)，能給出意見(jiàn)和建議最好！ |
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mizhoulong
木蟲(chóng) (著名寫(xiě)手)
環(huán)境衛(wèi)生、微生物學(xué)
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
xiaoganghehe: 金幣+4, ★★★很有幫助, 挺好的 2013-08-26 15:01:31
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這個(gè)是生化書(shū)上最經(jīng)典的知識(shí)啊，乳糖操縱子啊。 LacZ基因--合成半乳糖苷酶 LacY基因--合成通透酶 LacA基因--合成乙�；D(zhuǎn)移酶 三個(gè)酶，其中起作用的是半乳糖苷酶，通透酶可以將半乳糖苷酶轉(zhuǎn)移到胞外。 當(dāng)然，胞內(nèi)酶也可以少量釋放到胞外，這個(gè)在研制大腸桿菌培養(yǎng)基的時(shí)候仔細(xì)研究過(guò)，呵呵 |
4樓2013-08-26 08:40:53
【答案】應(yīng)助回帖
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xiaoganghehe: 金幣+1, ★★★很有幫助, 有幫助 2013-08-23 20:57:30
laozuzunzhe: 金幣+3, good！ 2013-08-24 08:34:28
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即便是胞內(nèi)酶，在誘導(dǎo)過(guò)程中也會(huì)被少量的釋放， 菌體細(xì)胞的破壞死亡也會(huì)使得胞內(nèi)酶釋放。 若是冷凍高速離心的話(huà)，也會(huì)多少破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。 再有PBS多少也有改變細(xì)胞通透性的作用。 而且可能跟你的酶活也有關(guān)。 個(gè)人意見(jiàn)，權(quán)當(dāng)參考吧。 |
2樓2013-08-23 20:36:06
xiaoganghehe
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3樓2013-08-23 20:57:42
xiaoganghehe
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