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xiaoganghehe銅蟲 (著名寫手)
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[求助]
該怎么理解胞內(nèi)酶和胞外酶？高速離心能讓大腸桿菌細胞破裂嗎？
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小蟲是學(xué)材料的，最近在做關(guān)于大腸桿菌的實驗，但對生物一竅不通，因此請教幾個問題。 我的實驗過程如下：在含乳糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸桿菌，目的是誘導(dǎo)大腸桿菌產(chǎn)生β－半乳糖苷酶。隨后離心（轉(zhuǎn)速5000），用NaCl溶液清洗菌體，再離心（轉(zhuǎn)速7000），然后用PBS溶液清洗菌體沉淀，得到菌體濁液。然后再往菌體濁液中加入ONPG，ONPG是β－半乳糖苷酶的底物。論文上說，對于大腸桿菌，β－半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶。但在離心分離之后，我往菌液中加入ONPG，溶液很快就變成黃色了。 所以很困惑：既然β－半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶，為什么ONPG很快就水解了呢？難道是β－半乳糖苷酶能被大腸桿菌很快釋放到溶液中？或者離心能使大腸桿菌細胞破裂，β－半乳糖苷酶被釋放出來？ 希望能聽聽高人的意見，能給出意見和建議最好！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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即便是胞內(nèi)酶，在誘導(dǎo)過程中也會被少量的釋放， 菌體細胞的破壞死亡也會使得胞內(nèi)酶釋放。 若是冷凍高速離心的話，也會多少破壞細胞結(jié)構(gòu)。 再有PBS多少也有改變細胞通透性的作用。 而且可能跟你的酶活也有關(guān)。 個人意見，權(quán)當(dāng)參考吧。 |
2樓2013-08-23 20:36:06
xiaoganghehe
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3樓2013-08-23 20:57:42
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5樓2013-08-26 15:04:16
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7樓2013-08-28 21:06:47
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8樓2013-08-29 08:58:03
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