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xiaoganghehe銅蟲 (著名寫手)
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[求助]
該怎么理解胞內(nèi)酶和胞外酶？高速離心能讓大腸桿菌細(xì)胞破裂嗎？
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小蟲是學(xué)材料的，最近在做關(guān)于大腸桿菌的實(shí)驗(yàn)，但對生物一竅不通，因此請教幾個(gè)問題。 我的實(shí)驗(yàn)過程如下：在含乳糖的培養(yǎng)基中培養(yǎng)大腸桿菌，目的是誘導(dǎo)大腸桿菌產(chǎn)生β－半乳糖苷酶。隨后離心（轉(zhuǎn)速5000），用NaCl溶液清洗菌體，再離心（轉(zhuǎn)速7000），然后用PBS溶液清洗菌體沉淀，得到菌體濁液。然后再往菌體濁液中加入ONPG，ONPG是β－半乳糖苷酶的底物。論文上說，對于大腸桿菌，β－半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶。但在離心分離之后，我往菌液中加入ONPG，溶液很快就變成黃色了。 所以很困惑：既然β－半乳糖苷酶是胞內(nèi)酶，為什么ONPG很快就水解了呢？難道是β－半乳糖苷酶能被大腸桿菌很快釋放到溶液中？或者離心能使大腸桿菌細(xì)胞破裂，β－半乳糖苷酶被釋放出來？ 希望能聽聽高人的意見，能給出意見和建議最好！ |
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xiaoganghehe
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9樓2013-08-29 09:12:12
【答案】應(yīng)助回帖
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即便是胞內(nèi)酶，在誘導(dǎo)過程中也會(huì)被少量的釋放， 菌體細(xì)胞的破壞死亡也會(huì)使得胞內(nèi)酶釋放。 若是冷凍高速離心的話，也會(huì)多少破壞細(xì)胞結(jié)構(gòu)。 再有PBS多少也有改變細(xì)胞通透性的作用。 而且可能跟你的酶活也有關(guān)。 個(gè)人意見，權(quán)當(dāng)參考吧。 |
2樓2013-08-23 20:36:06
xiaoganghehe
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3樓2013-08-23 20:57:42
mizhoulong
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【答案】應(yīng)助回帖
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這個(gè)是生化書上最經(jīng)典的知識啊，乳糖操縱子啊。 LacZ基因--合成半乳糖苷酶 LacY基因--合成通透酶 LacA基因--合成乙酰基轉(zhuǎn)移酶 三個(gè)酶，其中起作用的是半乳糖苷酶，通透酶可以將半乳糖苷酶轉(zhuǎn)移到胞外。 當(dāng)然，胞內(nèi)酶也可以少量釋放到胞外，這個(gè)在研制大腸桿菌培養(yǎng)基的時(shí)候仔細(xì)研究過，呵呵 |
4樓2013-08-26 08:40:53
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