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jiyu新蟲(chóng) (初入文壇)
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[求助]
平板保存的菌再劃線(xiàn)長(zhǎng)不出來(lái)了
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大家好。我使用5月份4℃保存的黃桿菌平板（用來(lái)做PAH的生物降解），沒(méi)長(zhǎng)出來(lái)。就用液體培養(yǎng)基試了下。具體操作步驟是： 1、將裝有液體培養(yǎng)基（封口）的三角瓶直接放在無(wú)菌操作臺(tái)上，開(kāi)紫外滅菌30分鐘。（以前師姐都是放入滅菌鍋，我嫌耗時(shí)長(zhǎng)，就偷了個(gè)懶，按理說(shuō)紫外也可以殺菌哈。） 2、然后將5月份的平板菌，挑了一環(huán)到液體里。放在水浴振蕩器里培養(yǎng)。 第3天培養(yǎng)液透明度降低，呈現(xiàn)黃色。我想著應(yīng)該是長(zhǎng)出來(lái)了。但是擔(dān)心活性不夠。就重復(fù)上述步驟。將培養(yǎng)液里的菌液重新接入新的培養(yǎng)液里繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。但是今天是第3天，我發(fā)現(xiàn)新的三個(gè)轉(zhuǎn)接瓶里，一個(gè)變成深綠色了（懷疑染菌�。�，其他兩個(gè)的液面均出現(xiàn)白色的泡沫。求助： 1、這是否是染菌現(xiàn)象？ 2、因?yàn)辄S桿菌出現(xiàn)過(guò)平板傳代不長(zhǎng)菌，這說(shuō)明菌已失活，我再用它在液體里長(zhǎng)出來(lái)了。需要重復(fù)的用液體轉(zhuǎn)接嗎？還是說(shuō)只要長(zhǎng)出來(lái)了，就可以再接入平板？ 3、我的操作步驟是否有問(wèn)題？ 因微生物知識(shí)欠缺，還請(qǐng)大家指點(diǎn)，感激不盡！ |
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【答案】應(yīng)助回帖
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laozuzunzhe: 金幣+3, 鼓勵(lì)熱心應(yīng)助！ 2013-08-30 23:43:55
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1、絕對(duì)染菌了！��！ 培養(yǎng)基一定要采取高壓滅菌，你隔著瓶子照照紫外是沒(méi)用的。超凈臺(tái)里面的紫外燈只是能對(duì)直接照射到的臺(tái)面和你瓶子的外表面起作用。而且整個(gè)操作過(guò)程中的槍頭等也要高壓滅菌！ 2、一般菌種都是用20%的甘油保存在-80℃冰箱內(nèi)，你在4度放了5個(gè)月不一定再用液體能搖起來(lái)。如果搖起來(lái)了，你就涂個(gè)板，看看平板上長(zhǎng)起來(lái)的菌是不是你要的黃桿菌。 好在樓主最后說(shuō)了自己微生物學(xué)知識(shí)欠缺，不然我不能相信學(xué)微生物的敢這樣操作。。。。請(qǐng)注意無(wú)菌操作，還有聽(tīng)聽(tīng)你師姐的建議。 |
3樓2013-08-30 22:06:49
jiyu
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2樓2013-08-30 21:10:22
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4樓2013-08-31 10:23:17
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這個(gè)菌種和其他的一株菌，師姐一直是用的試管轉(zhuǎn)接，差不多每月就轉(zhuǎn)一次，然后黃桿菌有一次轉(zhuǎn)了之后就沒(méi)長(zhǎng)出來(lái)了。后來(lái)也是搖了下，長(zhǎng)出來(lái)一顆點(diǎn)，就把這個(gè)點(diǎn)涂出來(lái)的菌，和另一株菌分別用甘油保存在了-70冰箱。請(qǐng)教下亞杰： 1、我當(dāng)時(shí)-70保存的時(shí)候。是取了甘油80mL，生理鹽水20mL，混勻后高溫滅菌。取培養(yǎng)了1天的菌液5mL，加保存液2mL，裝于保存管中。沒(méi)有用液氮凍，直接放入-70冰箱。這個(gè)操作有誤嗎？ 2、如果直接是用-70的菌，是直接取出來(lái)化了投進(jìn)液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，還需要活化嘛？如何活化？ 3、因?yàn)檫@個(gè)菌是用來(lái)降解污染物實(shí)驗(yàn)用的，短期的保存使用固體培養(yǎng)基可以不？ |
5樓2013-08-31 10:47:19
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