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jiyu新蟲 (初入文壇)
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[求助]
平板保存的菌再劃線長不出來了
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大家好。我使用5月份4℃保存的黃桿菌平板（用來做PAH的生物降解），沒長出來。就用液體培養(yǎng)基試了下。具體操作步驟是： 1、將裝有液體培養(yǎng)基（封口）的三角瓶直接放在無菌操作臺上，開紫外滅菌30分鐘。（以前師姐都是放入滅菌鍋，我嫌耗時長，就偷了個懶，按理說紫外也可以殺菌哈。） 2、然后將5月份的平板菌，挑了一環(huán)到液體里。放在水浴振蕩器里培養(yǎng)。 第3天培養(yǎng)液透明度降低，呈現(xiàn)黃色。我想著應(yīng)該是長出來了。但是擔(dān)心活性不夠。就重復(fù)上述步驟。將培養(yǎng)液里的菌液重新接入新的培養(yǎng)液里繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。但是今天是第3天，我發(fā)現(xiàn)新的三個轉(zhuǎn)接瓶里，一個變成深綠色了（懷疑染菌�。渌麅蓚�的液面均出現(xiàn)白色的泡沫。求助： 1、這是否是染菌現(xiàn)象？ 2、因為黃桿菌出現(xiàn)過平板傳代不長菌，這說明菌已失活，我再用它在液體里長出來了。需要重復(fù)的用液體轉(zhuǎn)接嗎？還是說只要長出來了，就可以再接入平板？ 3、我的操作步驟是否有問題？ 因微生物知識欠缺，還請大家指點，感激不盡！ |
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小小亞杰
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
laozuzunzhe: 金幣+3, 鼓勵熱心應(yīng)助！ 2013-08-30 23:43:55
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1、絕對染菌了！��！ 培養(yǎng)基一定要采取高壓滅菌，你隔著瓶子照照紫外是沒用的。超凈臺里面的紫外燈只是能對直接照射到的臺面和你瓶子的外表面起作用。而且整個操作過程中的槍頭等也要高壓滅菌！ 2、一般菌種都是用20%的甘油保存在-80℃冰箱內(nèi)，你在4度放了5個月不一定再用液體能搖起來。如果搖起來了，你就涂個板，看看平板上長起來的菌是不是你要的黃桿菌。 好在樓主最后說了自己微生物學(xué)知識欠缺，不然我不能相信學(xué)微生物的敢這樣操作。。。。請注意無菌操作，還有聽聽你師姐的建議。 |
3樓2013-08-30 22:06:49
jiyu
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2樓2013-08-30 21:10:22
jiyu
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4樓2013-08-31 10:23:17
jiyu
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這個菌種和其他的一株菌，師姐一直是用的試管轉(zhuǎn)接，差不多每月就轉(zhuǎn)一次，然后黃桿菌有一次轉(zhuǎn)了之后就沒長出來了。后來也是搖了下，長出來一顆點，就把這個點涂出來的菌，和另一株菌分別用甘油保存在了-70冰箱。請教下亞杰： 1、我當(dāng)時-70保存的時候。是取了甘油80mL，生理鹽水20mL，混勻后高溫滅菌。取培養(yǎng)了1天的菌液5mL，加保存液2mL，裝于保存管中。沒有用液氮凍，直接放入-70冰箱。這個操作有誤嗎？ 2、如果直接是用-70的菌，是直接取出來化了投進液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，還需要活化嘛？如何活化？ 3、因為這個菌是用來降解污染物實驗用的，短期的保存使用固體培養(yǎng)基可以不？ |
5樓2013-08-31 10:47:19
skull123
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6樓2013-08-31 14:50:08
skull123
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7樓2013-08-31 14:52:32
8樓2013-08-31 15:03:17
jiyu
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9樓2013-08-31 15:09:54
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【答案】應(yīng)助回帖
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jiyu: 金幣+4, ★★★很有幫助, 太感謝binfongge了！ 2013-09-05 19:55:43
jiyu: 金幣+4, ★★★很有幫助, 太感謝binfongge了！ 2013-09-05 19:55:43
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1、操作大體上是對的，一般甘油終濃度為20%即可。 我們通常配置40%的甘油，然后保存菌種時等體積加菌和甘油。不過你這樣操作也是可行的。 2、-70保存的菌種投進液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)，就是一次活化的過程，等菌長起來再去后續(xù)操作就行了。 我通常是從-70吸一點菌體出來搖菌或者涂平板，待其長起來進行后續(xù)操作。 3、短期保存，在平板上長起來，封好平板，放在4度可用2周左右。 補充一點，我對平板和試管斜面劃線的區(qū)別不是很清楚，不過我通常同平板劃線，感覺試管斜面更適合于保存菌種，就是麻煩一點。 還有這個菌是否還需要多用液體的轉(zhuǎn)接其次類似活化，要根據(jù)菌的活性來說。一般的大腸桿菌就不用活化了，黃桿菌我不太了解。但你說這個菌種是用來降解污染物試驗用，那么你將長起來的菌試著去處理一下污染物，如果有效就不用再活化了。 |
10樓2013-09-01 21:34:58
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