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szasza鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
激光共聚焦觀察水稻穎果的亞細胞定位
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| 有人做過激光共聚焦觀察轉(zhuǎn)基因植物的GFP表達么，用的是穩(wěn)轉(zhuǎn)植株進行觀察，我想問一下上鏡觀察前的前處理步驟是什么？如何制片？能否長期保存？能否固定保存？謝謝！ |
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zb0806030
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2樓2013-09-02 22:57:31
szasza
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3樓2013-09-02 23:41:31
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
xy656691: 金幣+8, 應(yīng)助指數(shù)+1, 我們以前也沒有保存過,不過今天看見你的保存方法了.如果長時間保存的話,保存種子不是更好 2013-09-03 21:37:03
szasza: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-03 22:08:55
xy656691: 金幣+8, 應(yīng)助指數(shù)+1, 我們以前也沒有保存過,不過今天看見你的保存方法了.如果長時間保存的話,保存種子不是更好 2013-09-03 21:37:03
szasza: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-03 22:08:55
| 固定可以，可以用Tris-Hcl buffer中加4%的多聚甲醛和0.5%的戊二醛（戊二醛的濃度我有點不太確定了，你可以查一下文獻），但你想長期保存不太可能，因為GFP的熒光會淬滅，你固定以后可以避光保存，至于能保存多長時間就跟你的材料有關(guān)了，像我們擬南芥的材料，一般也就保存一兩天熒光就不行了。另外保存的時候可以加點抗熒光淬滅劑或許可以效果好一點，但不要指望能保存很長時間。 |
4樓2013-09-03 20:05:21
szasza
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5樓2013-09-03 22:14:00
zb0806030
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【答案】應(yīng)助回帖
★ ★ ★ ★ ★
szasza: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝！ 2013-09-04 21:27:25
szasza: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝！ 2013-09-04 21:27:25
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如果你看到與未轉(zhuǎn)材料類似的熒光的話，以我的經(jīng)驗判斷應(yīng)該是材料的自發(fā)熒光，不是真正的蛋白的熒光。 像你說的這種情況有很多可能:一種是你的蛋白不在該部位表達，另一種是蛋白連GFP沒轉(zhuǎn)入植株，還有就是取材時間太長熒光淬滅了，我不太了解你的材料，你可以自己分析一下哪種可能性比較大。對于最后一種情況，你可以試一下取材后盡快觀察或者取材后固定，但固定也是需要抽氣的，這樣固定液才能快速進入材料起到做用。取材的方法應(yīng)該不會有太大的問題，我覺得。 [ 發(fā)自手機版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
6樓2013-09-03 22:58:16
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