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szasza鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)
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[求助]
激光共聚焦觀察水稻穎果的亞細(xì)胞定位
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| 有人做過激光共聚焦觀察轉(zhuǎn)基因植物的GFP表達(dá)么，用的是穩(wěn)轉(zhuǎn)植株進(jìn)行觀察，我想問一下上鏡觀察前的前處理步驟是什么？如何制片？能否長(zhǎng)期保存？能否固定保存？謝謝！ |
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zb0806030
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2樓2013-09-02 22:57:31
szasza
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3樓2013-09-02 23:41:31
zb0806030
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xy656691: 金幣+8, 應(yīng)助指數(shù)+1, 我們以前也沒有保存過,不過今天看見你的保存方法了.如果長(zhǎng)時(shí)間保存的話,保存種子不是更好 2013-09-03 21:37:03
szasza: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-03 22:08:55
xy656691: 金幣+8, 應(yīng)助指數(shù)+1, 我們以前也沒有保存過,不過今天看見你的保存方法了.如果長(zhǎng)時(shí)間保存的話,保存種子不是更好 2013-09-03 21:37:03
szasza: 金幣+5, ★★★★★最佳答案 2013-09-03 22:08:55
| 固定可以，可以用Tris-Hcl buffer中加4%的多聚甲醛和0.5%的戊二醛（戊二醛的濃度我有點(diǎn)不太確定了，你可以查一下文獻(xiàn)），但你想長(zhǎng)期保存不太可能，因?yàn)镚FP的熒光會(huì)淬滅，你固定以后可以避光保存，至于能保存多長(zhǎng)時(shí)間就跟你的材料有關(guān)了，像我們擬南芥的材料，一般也就保存一兩天熒光就不行了。另外保存的時(shí)候可以加點(diǎn)抗熒光淬滅劑或許可以效果好一點(diǎn)，但不要指望能保存很長(zhǎng)時(shí)間。 |
4樓2013-09-03 20:05:21
szasza
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5樓2013-09-03 22:14:00
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szasza: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝！ 2013-09-04 21:27:25
szasza: 金幣+5, ★★★★★最佳答案, 非常感謝！ 2013-09-04 21:27:25
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如果你看到與未轉(zhuǎn)材料類似的熒光的話，以我的經(jīng)驗(yàn)判斷應(yīng)該是材料的自發(fā)熒光，不是真正的蛋白的熒光。 像你說的這種情況有很多可能:一種是你的蛋白不在該部位表達(dá)，另一種是蛋白連GFP沒轉(zhuǎn)入植株，還有就是取材時(shí)間太長(zhǎng)熒光淬滅了，我不太了解你的材料，你可以自己分析一下哪種可能性比較大。對(duì)于最后一種情況，你可以試一下取材后盡快觀察或者取材后固定，但固定也是需要抽氣的，這樣固定液才能快速進(jìn)入材料起到做用。取材的方法應(yīng)該不會(huì)有太大的問題，我覺得。 [ 發(fā)自手機(jī)版 http://www.gaoyang168.com/3g ] |
6樓2013-09-03 22:58:16
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