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yumeng_6964

金蟲(chóng) (小有名氣)

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[交流] 請(qǐng)大神幫我看看我的實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果分析一下失敗的原因有圖有真相

有圖有真相吖
幫忙分析一下謝謝
所用試劑和儀器回復(fù)在二樓

Amplification Plot2.jpg

請(qǐng)大神幫我看看我的實(shí)時(shí)定量PCR結(jié)果分析一下失敗的原因有圖有真相-1

Melt Curve.jpg

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Multicomponent Plot.jpg

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Raw Data Plot.jpg

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RQ vs Sample.jpg

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w169h1317780_1378109714_236.jpg

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[ Last edited by yumeng_6964 on 2013-9-3 at 10:44 ]

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1樓 2013-09-03 10:43:30

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跳舞的駱駝

金蟲(chóng) (初入文壇)

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yumeng_6964: 金幣+2, 我這次是沒(méi)加Rox的而且加液過(guò)程稍微有點(diǎn)問(wèn)題我已經(jīng)加了延伸的步驟試了一下第二次做效果就很好啦~ 2013-09-05 15:54:27

好厲害，怎么能做成這樣子呢。
擴(kuò)增曲線是不是設(shè)置的問(wèn)題，你有沒(méi)有加rox，沒(méi)加就設(shè)置none。
40循環(huán)(95度3s+60度30s),這點(diǎn)加一步72度延伸。
你確定你的模板普通PCR沒(méi)有問(wèn)題。

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4樓2013-09-05 13:22:15

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yumeng_6964

金蟲(chóng) (小有名氣)

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反應(yīng)試劑是Takara SYBR Premix Ex Taq II (Tli RNaseH Plus)；
反應(yīng)條件按照說(shuō)明書(shū)來(lái)95度30s,40循環(huán)(95度3s+60度30s),溶解曲線是：95度15s+60度1min+95度15s；
反應(yīng)儀器是AB 7500 fast.

操作都很小心，冰上進(jìn)行。每一步都離心，沒(méi)有氣泡。

謝謝啦！��！

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2樓2013-09-03 10:44:19

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beautybanana

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kx444555: 金幣+2, 鼓勵(lì)交流 2013-09-04 16:34:27
yumeng_6964: 金幣+3 2013-09-05 15:53:35

你在PCR儀器上打開(kāi)你擴(kuò)增結(jié)果的軟件,把圖調(diào)出來(lái),調(diào)整下縱坐標(biāo)的范圍到合適的值(溶解曲線應(yīng)該就正常了),擴(kuò)增曲線你把自動(dòng)的改為手動(dòng)的看看,后面的圖形應(yīng)該就不彎曲了.試試

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3樓2013-09-04 16:25:40

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