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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » SOE-PCR
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qsx04152006木蟲 (知名作家)
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[求助]
SOE-PCR
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本人準備將兩端基因連接在一起，一段長1620bp，，另一端長106bp，不知道用SOE-PCR能否將他們連接在一起。 1、107bp做pcr容易擴嗎，產生引物二聚體的話怎么回收？ 2、我的引物設計是否合適？重疊部分為20bp 基因1的序列：ATGGGGACAGTTAATAAACCTGTG.......CACTTCTACGATATGCCGCA 上游引物A：ATGGGGACAGTTAATAAACCTGTG（24bp） 下游引物B: GAATAAATTGACAATATTTG+TGCGGCATATCGTAGAAGTG 基因2的序列,106+TAA：CAAATATTGTCAATTTATTCTACAGTGGCGAGCTCCCTAGCACTGGCAATCATGGTAGCTGGTCTATCCTTATGGATGTGCTCCAATGGGTCGTTACAATGCAGAA+TAA（共109bp） 上游引物C：CACTTCTACGATATGCCGCA（20bp，基因1的3”端20bp序列）+ CAAATATTGTCAATTTATTC（基因2的5“端20bp） 下游引物D：TTATTCTGCATTGTAACGACCCATTG（26bp），其中用引物A和B擴增基因1，用引物C和D擴增基因2，然后用各自的PCR產物做模板，不加引物空延伸7個循環(huán)，再用引物A和D為引物，以上步空延伸的產物做模板，進行PCR擴增，這樣是否可行？請大家指點，謝謝！ |
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5樓2013-09-05 11:48:09
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