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yhz918新蟲 (初入文壇)
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家蠶表皮二維電泳圖
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| 請(qǐng)問各位大俠,為什么我的電泳圖跑成這樣,銀染的。。 |
蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |

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橫紋眾多,應(yīng)該是聚焦不完全。 原因與對(duì)策: 1.樣品沒有完全溶解,上樣前確保樣品完全溶解并且保持穩(wěn)定。 2.樣品中存在干擾IEF的物質(zhì)存在,改進(jìn)樣品制備方法,可用分子篩、超濾、透析等純化蛋白質(zhì)樣品。 3.樣品中存在存在干擾IEF的離子。可用超濾、透析等純化蛋白質(zhì)樣品降低離子強(qiáng)度(離子濃度要小于10mmol/L);或者用TCA、丙酮沉淀蛋白質(zhì),然后用緩沖溶液重新溶解被沉淀的蛋白質(zhì)(當(dāng)然棄去TCA、丙酮)。 4.做等電聚焦時(shí)離子型去垢劑太多時(shí)也會(huì)出現(xiàn)橫紋,將樣品用超濾、透析去掉離子型去垢劑,改用離子型去垢劑替代之。 5.上樣量過大。需要適當(dāng)減少上樣量。 6.聚焦時(shí)間過短使得聚焦不完全。需要適當(dāng)延長(zhǎng)聚焦時(shí)間。 7.聚焦時(shí)間過長(zhǎng),引起膠內(nèi)滲水,并且改變了凝膠的內(nèi)部的電場(chǎng)微環(huán)境,使得蛋白質(zhì)樣品再次發(fā)生移動(dòng),導(dǎo)致橫紋。電泳時(shí)間不能過長(zhǎng)。 8.樓主實(shí)驗(yàn)用的水是不是也有問題。應(yīng)該用超純水。 |
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新蟲 (初入文壇)

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