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小木蟲論壇-學術科研互動平臺 » 生物醫(yī)藥區(qū) » 分子生物 » 綜合其他 » 家蠶表皮二維電泳圖
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家蠶表皮二維電泳圖
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2013-09-05 18:39:51, 1.71 M
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4樓2013-09-06 10:28:16
凌波麗
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【答案】應助回帖
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感謝參與，應助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+2, 贈人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-06 08:24:40
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橫紋眾多，應該是聚焦不完全。 原因與對策： 1.樣品沒有完全溶解，上樣前確保樣品完全溶解并且保持穩(wěn)定。 2.樣品中存在干擾IEF的物質存在，改進樣品制備方法，可用分子篩、超濾、透析等純化蛋白質樣品。 3.樣品中存在存在干擾IEF的離子。可用超濾、透析等純化蛋白質樣品降低離子強度（離子濃度要小于10mmol/L)；或者用TCA、丙酮沉淀蛋白質，然后用緩沖溶液重新溶解被沉淀的蛋白質（當然棄去TCA、丙酮）。 4.做等電聚焦時離子型去垢劑太多時也會出現(xiàn)橫紋，將樣品用超濾、透析去掉離子型去垢劑，改用離子型去垢劑替代之。 5.上樣量過大。需要適當減少上樣量。 6.聚焦時間過短使得聚焦不完全。需要適當延長聚焦時間。 7.聚焦時間過長，引起膠內滲水，并且改變了凝膠的內部的電場微環(huán)境，使得蛋白質樣品再次發(fā)生移動，導致橫紋。電泳時間不能過長。 8.樓主實驗用的水是不是也有問題。應該用超純水。 |
2樓2013-09-06 00:20:58
凌波麗
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2013-09-06 00:25:21, 1.71 M
3樓2013-09-06 00:23:44
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