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yhz918新蟲 (初入文壇)
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2013-09-05 18:39:51, 1.71 M
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 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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凌波麗
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2013-09-06 00:25:21, 1.71 M
3樓2013-09-06 00:23:44
凌波麗
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【答案】應(yīng)助回帖
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橫紋眾多，應(yīng)該是聚焦不完全。 原因與對(duì)策： 1.樣品沒(méi)有完全溶解，上樣前確保樣品完全溶解并且保持穩(wěn)定。 2.樣品中存在干擾IEF的物質(zhì)存在，改進(jìn)樣品制備方法，可用分子篩、超濾、透析等純化蛋白質(zhì)樣品。 3.樣品中存在存在干擾IEF的離子�？捎贸瑸V、透析等純化蛋白質(zhì)樣品降低離子強(qiáng)度（離子濃度要小于10mmol/L)；或者用TCA、丙酮沉淀蛋白質(zhì)，然后用緩沖溶液重新溶解被沉淀的蛋白質(zhì)（當(dāng)然棄去TCA、丙酮）。 4.做等電聚焦時(shí)離子型去垢劑太多時(shí)也會(huì)出現(xiàn)橫紋，將樣品用超濾、透析去掉離子型去垢劑，改用離子型去垢劑替代之。 5.上樣量過(guò)大。需要適當(dāng)減少上樣量。 6.聚焦時(shí)間過(guò)短使得聚焦不完全。需要適當(dāng)延長(zhǎng)聚焦時(shí)間。 7.聚焦時(shí)間過(guò)長(zhǎng)，引起膠內(nèi)滲水，并且改變了凝膠的內(nèi)部的電場(chǎng)微環(huán)境，使得蛋白質(zhì)樣品再次發(fā)生移動(dòng)，導(dǎo)致橫紋。電泳時(shí)間不能過(guò)長(zhǎng)。 8.樓主實(shí)驗(yàn)用的水是不是也有問(wèn)題。應(yīng)該用超純水。 |
2樓2013-09-06 00:20:58
yhz918
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4樓2013-09-06 10:28:16
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