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食品蟲蟲銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
綠膿桿菌平板計(jì)數(shù)問題 已有1人參與
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1.我做的綠膿桿菌（好氧菌、兼性厭氧菌）傾注培養(yǎng)，稀釋度做到-8、-9、-10、-11，只記錄有明顯特征的菌落發(fā)現(xiàn)菌落梯度不是很明顯，幾個(gè)梯度做的計(jì)數(shù)差不多，并且均大于30且不超過300，平板表面有很多可見的大菌落，但是有很多的小點(diǎn)生長培養(yǎng)基內(nèi)部（附圖如下），不確定是否是綠膿桿菌，如果記錄，-8、-9、-10三個(gè)稀釋度的菌落就會超過300，但是由于小點(diǎn)過小，計(jì)數(shù)十分困難，且培養(yǎng)多久均不能生長成容易計(jì)數(shù)的菌落。因此我做了小驗(yàn)證試驗(yàn)：將僅有小點(diǎn)的菌落切下一塊放入LB培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)菌液變綠（綠膿桿菌液體搖瓶特征），菌液 革蘭氏染色也為陰性菌，且顯微鏡下顯示綠膿桿菌特征。2.請問除了增大稀釋度還能如何處理這種情況，上述方法是否能證明小點(diǎn)是綠膿桿菌？計(jì)數(shù)時(shí)是否需要記錄這些小點(diǎn)？是否有人做傾注時(shí)在其他菌上也有類似情況？ 20130904_153323.jpg 20130904_153818.jpg 20130904_153829.jpg |
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2樓2013-09-06 16:32:00
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根據(jù)我的經(jīng)驗(yàn)：活化兩次（一次固體劃線，一次試管活化，35℃,220rpm,16h，培養(yǎng)基為肉湯培養(yǎng)基）的綠膿桿菌10倍稀釋7次或8次,取100ul涂板足矣，計(jì)算出原菌液的數(shù)量級在10的九次方，前面的系數(shù)一般在3-6之間。希望能幫到你 |
3樓2013-09-06 20:56:07
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5樓2013-09-07 15:44:01
mizhoulong
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1.首先確定你的菌是不是純菌——?jiǎng)澗�接種分單菌落，鑒定單菌落； 2.其次確定你的培養(yǎng)基有無污染——將空白平板倒置于溫箱中培養(yǎng)72小時(shí)； 3.再次確定你的培養(yǎng)過程有無污染——實(shí)驗(yàn)的每一個(gè)步驟都設(shè)置空白對照； 4.最后確定你的原始樣品中有無細(xì)小顆粒——食品、化妝品中常見。 —————————————————————————————————————— 以上都確定無誤后，將純菌在富營養(yǎng)培養(yǎng)基上（TSA常用）傳代兩次，將新鮮培養(yǎng)的細(xì)菌斜面洗下來（總量一般為10E9 CFU~10E11CFU,系列稀釋到10E-10，接種10E-7~10E-9，一般可測出原始菌液濃度。 培養(yǎng)48h以后，因?yàn)槭褂脙A注法，在瓊脂內(nèi)部的菌落生長不良，一般呈細(xì)小的點(diǎn)，表面的因?yàn)榻佑|空氣，能長得飽滿。 希望能有用。 |
6樓2013-09-09 09:07:53
mizhoulong
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9樓2014-01-08 13:37:20
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