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食品蟲蟲銅蟲 (初入文壇)
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[求助]
綠膿桿菌平板計數(shù)問題 已有1人參與
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1.我做的綠膿桿菌（好氧菌、兼性厭氧菌）傾注培養(yǎng)，稀釋度做到-8、-9、-10、-11，只記錄有明顯特征的菌落發(fā)現(xiàn)菌落梯度不是很明顯，幾個梯度做的計數(shù)差不多，并且均大于30且不超過300，平板表面有很多可見的大菌落，但是有很多的小點生長培養(yǎng)基內(nèi)部（附圖如下），不確定是否是綠膿桿菌，如果記錄，-8、-9、-10三個稀釋度的菌落就會超過300，但是由于小點過小，計數(shù)十分困難，且培養(yǎng)多久均不能生長成容易計數(shù)的菌落。因此我做了小驗證試驗：將僅有小點的菌落切下一塊放入LB培養(yǎng)基中搖瓶培養(yǎng)發(fā)現(xiàn)菌液變綠（綠膿桿菌液體搖瓶特征），菌液 革蘭氏染色也為陰性菌，且顯微鏡下顯示綠膿桿菌特征。2.請問除了增大稀釋度還能如何處理這種情況，上述方法是否能證明小點是綠膿桿菌？計數(shù)時是否需要記錄這些小點？是否有人做傾注時在其他菌上也有類似情況？ 20130904_153323.jpg 20130904_153818.jpg 20130904_153829.jpg |
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wairi
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【答案】應(yīng)助回帖
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根據(jù)我的經(jīng)驗：活化兩次（一次固體劃線，一次試管活化，35℃,220rpm,16h，培養(yǎng)基為肉湯培養(yǎng)基）的綠膿桿菌10倍稀釋7次或8次,取100ul涂板足矣，計算出原菌液的數(shù)量級在10的九次方，前面的系數(shù)一般在3-6之間。希望能幫到你 |
3樓2013-09-06 20:56:07
食品蟲蟲
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4樓2013-09-07 15:41:20
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