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高手請(qǐng)進(jìn)--金黃色葡萄球菌的electroporation問題
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各位蟲友們， 目前這個(gè)問題已經(jīng)困惑我了將近半年的時(shí)間，真心的懇請(qǐng)蟲友們幫幫我。 為了做一個(gè)臨床株的mutant strain， 我需要將一個(gè)重組的plasmid通過electroporation導(dǎo)入到這個(gè)金黃色葡萄球菌中。已經(jīng)幾乎確定過了所有步驟沒有弄錯(cuò)--先酶切質(zhì)粒和target DNA--進(jìn)行l(wèi)igation之后--tansformation到E.coli(DH5a)--electroporation到RN4220--細(xì)菌正常長出--再提質(zhì)粒--electroporation到這個(gè)臨床株的competent cells-------------什么也沒長出來（大概做了幾十次，從檢查competent cells到重組plasmid測(cè)序及PCR確認(rèn)等等）！��！ 真心著急，pasmid進(jìn)不去，就做不了mutant strain，實(shí)驗(yàn)就不能繼續(xù)往下進(jìn)行。希望蟲友們能給出一些指點(diǎn)，建議，和一些相關(guān)資料能供我學(xué)習(xí)。在此，先謝過了！！   |
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