mancai0112

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[求助] SDS-PAGE電泳為什么濃縮膠沒有起到濃縮的效果

今天  我跑的SDS-page電泳  ，SDS-PAGE電泳為什么濃縮膠沒有起到濃縮的效果？
染色后濃縮膠上顯示有條帶，膠的配制按SDS-PAGE試劑盒
求解決辦法！  謝謝

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1樓 2013-09-12 12:46:22

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cicelyzh

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1. 濃縮膠的長度是否夠？
2. 確定配濃縮膠的tris緩沖液的pH是6.8，不能用分離膠的tris。

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2樓2013-09-13 00:45:45

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mancai0112

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引用回帖:

2樓: Originally posted by cicelyzh at 2013-09-13 00:45:45
1. 濃縮膠的長度是否夠？
2. 確定配濃縮膠的tris緩沖液的pH是6.8，不能用分離膠的tris。

濃縮膠3ml
tris緩沖液的PH也沒問題，與同學(xué)討論后，認為可能與電泳緩沖液有關(guān)或者與濃縮膠的濃度有關(guān)，今天又重跑的，電泳緩沖液新配制的PH8.3，還是與之前出現(xiàn)相同問題，上樣后在膠上呈彌散狀，如果減小濃縮膠濃度可以嗎？

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3樓2013-09-13 13:35:32

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ykluuniu

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gyesang: 回帖置頂 2013-09-14 02:04:20

引用回帖:

3樓: Originally posted by mancai0112 at 2013-09-13 13:35:32
濃縮膠3ml
tris緩沖液的PH也沒問題，與同學(xué)討論后，認為可能與電泳緩沖液有關(guān)或者與濃縮膠的濃度有關(guān)，今天又重跑的，電泳緩沖液新配制的PH8.3，還是與之前出現(xiàn)相同問題，上樣后在膠上呈彌散狀，如果減小 ...

1.濃縮膠3ml,但是你沒說明你用的1.0還是1.5的板子？濃縮膠長一點沒關(guān)系的。
2.濃縮膠就用5％。
3.tris-Hcl的PH非常重要，不能弄錯，否則起不到濃縮作用。
4.電壓多少？80-100V，跑30分鐘，應(yīng)該足夠啦。
5.tris-甘氨酸緩沖液？應(yīng)該不是問題吧。

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4樓2013-09-13 13:55:02

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cicelyzh

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我問的是濃縮膠的長度。3ml的膠沒有說板子多大，膠的厚度，無法判斷。一般小膠的濃縮膠長度在6-8mm，大膠在1.5-2cm。
電泳緩沖液如果是tris-glycine體系，本身不用調(diào)pH，兩種緩沖物質(zhì)按照配方的比例就可以了。
濃縮膠的濃度一般在4-6%。濃度應(yīng)該不是問題，只要配膠緩沖液的pH對，應(yīng)該起到濃縮的效果。

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5樓2013-09-13 23:40:22

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4樓: Originally posted by ykluuniu at 2013-09-13 13:55:02
1.濃縮膠3ml,但是你沒說明你用的1.0還是1.5的板子？濃縮膠長一點沒關(guān)系的。
2.濃縮膠就用5％。
3.tris-Hcl的PH非常重要，不能弄錯，否則起不到濃縮作用。
4.電壓多少？80-100V，跑30分鐘，應(yīng)該足夠啦。
5.tris ...

我用的是 1.0 的板子濃縮膠3ml、長度約為3cm左右
濃縮膠電壓為80V 分離膠電壓為120V

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6樓2013-09-14 16:38:46

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pligent

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濃縮作用關(guān)鍵是濃縮膠區(qū)域要形成足夠的電場強度，就要讓你的濃縮膠里的甘氨酸解離程度要比緩沖液里氯離子解離程度小得多，所以濃縮膠和緩沖液PH確認調(diào)好應(yīng)該是沒有問題，不行的話，你可以試一下Tris--Tricine,Tris--硼酸

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betterthanbest

7樓2013-09-14 17:02:39

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