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[求助] SDS-PAGE制膠問(wèn)題

最近SDS-PAGE實(shí)驗(yàn)后期染色脫色時(shí)，濃縮膠老是會(huì)脫離分離膠，以前實(shí)驗(yàn)做完了膠還是完整的，好好的，不知道是不是最近溫度、濕度都增大的原因，要不要改變濃縮膠的配比濃度。。。。。。各位高手，指點(diǎn)一下。。。。。
剛接觸電泳實(shí)驗(yàn)，極度缺乏理論知識(shí)，大家有什么電泳基礎(chǔ)知識(shí)方面，或是電泳分析方面的書籍也可以推薦下！謝謝！

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1樓 2013-06-13 10:42:21

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amisking: 金幣+2, 鼓勵(lì)發(fā)帖應(yīng)助！ 2013-06-13 18:48:32
hepan1991: 金幣+2, ★有幫助 2013-06-20 09:38:17

我都是直接把濃縮膠切掉不要，估計(jì)現(xiàn)在溫度高，分離膠凝固的快又好，導(dǎo)致你加入濃縮膠是不能與分離膠再交叉形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)了，從而形成了你的結(jié)果。

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2樓2013-06-13 10:53:01

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cicelyzh

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hepan1991: 金幣+2, ★有幫助 2013-06-20 09:38:30

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4樓: Originally posted by hepan1991 at 2013-06-13 11:05:40
我看到濃縮膠配方中10%AP和10%TEMED都是不等量加入，而且是T一般都只有AP的五分之一，甚至是十分之一，但是我們實(shí)驗(yàn)室配方都是AP和T等量的，請(qǐng)問(wèn)，這兩者的量是怎么確定的？？？...

TEMED是交聯(lián)的底物，AP是催化劑，交聯(lián)時(shí)提供自由基。AP和TEMED的量在不同的配方中有些不同，并沒(méi)有特別的規(guī)定是多少，TEMED多時(shí)AP往往就少一些，總的來(lái)說(shuō)是為了控制膠凝的速度，一般濃縮膠在20-30分鐘凝好。

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5樓2013-06-14 07:19:49

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hepan1991: 金幣+1, ★有幫助 2013-06-20 09:38:41

一般都是不要濃縮膠的。除非你是想看看濃縮膠里是否有高分子蛋白才保留濃縮膠，否則直接去掉濃縮膠再染色脫色就可以了。

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3樓2013-06-13 11:03:25

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2樓: Originally posted by 生物小通 at 2013-06-13 10:53:01
我都是直接把濃縮膠切掉不要，估計(jì)現(xiàn)在溫度高，分離膠凝固的快又好，導(dǎo)致你加入濃縮膠是不能與分離膠再交叉形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)了，從而形成了你的結(jié)果。

我看到濃縮膠配方中10%AP和10%TEMED都是不等量加入，而且是T一般都只有AP的五分之一，甚至是十分之一，但是我們實(shí)驗(yàn)室配方都是AP和T等量的，請(qǐng)問(wèn)，這兩者的量是怎么確定的？？？

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4樓2013-06-13 11:05:40

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我們都是按照碧云天提供的配方配置的，怎么確定不清楚。T揮發(fā)，又有毒性，所以少用為好。

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6樓2013-06-14 14:46:06

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現(xiàn)在天氣熱，凝的比較快，建議凝時(shí)間長(zhǎng)些再用。

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7樓2013-06-14 15:12:57

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TEMED的量太大了吧！
我們一般12ml的最終配置的膠混合液加100ul的AP和7ul的TEMED

TEMED加的量比較少的，也很快凝固。

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6樓: Originally posted by 生物小通 at 2013-06-14 14:46:06
我們都是按照碧云天提供的配方配置的，怎么確定不清楚。T揮發(fā)，又有毒性，所以少用為好。...

碧云天提供的配方可不可以給我發(fā)一份

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10樓2016-02-16 19:53:08

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