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小墨825新蟲 (小有名氣)
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[求助]
Triton X-114法提取膜蛋白
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| 利用Triton X-114法分層得到膜蛋白（下層），怎么把Triton X-114去除？有沒有可能將膜蛋白轉(zhuǎn)移到水相？衷心求助！ |
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 分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 | 蛋白質(zhì)生物學(xué)實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn) |
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| TRITON X-114:2-(2-[4-(1,1,3,3-Tetramethylbutyl)phenoxy]ethoxy)ethanol;二乙二醇單[(1,1,3,3-四甲基丁基)苯基]醚;聚氧乙烯辛烷基苯酚醚，是一種表面活性劑，會結(jié)合到膜蛋白質(zhì)的表面形成一層親水層，而表面活性劑的疏水層會結(jié)合到膜蛋白質(zhì)的分子表面，這樣包裹了TRITON X-114的蛋白質(zhì)本身就到了水溶液里 |
2樓2013-09-17 22:24:52
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3樓2013-09-17 22:28:53
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4樓2013-09-17 22:31:27
小墨825
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大神！��！您做過這方面是么，對于您的回答，我有幾點(diǎn)疑問： 1. 分子篩要選擇哪種？“用分子篩層析分離出表面活性劑的疏水層會結(jié)合的膜蛋白質(zhì)后”這個我不是很理解，意思是說分子篩洗脫下來的是表面活性劑疏水層結(jié)合膜蛋白的部分是么？ 2. 加大水溶液的非極性，就是把疏水端溶下來嗎？將表面活性劑與膜蛋白分開？我需要保持蛋白的活性，乙醚可能會造成損失，并且這一步的溫度和時間是否有需求？不知道您做的效果如何？ 3.我查到一些文獻(xiàn)用到bio-beads 用batch method來去除，不知道您有沒有使用過？ 非常感謝您，如再次應(yīng)助，我會追加懸賞的，希望能多多指教。 |
5樓2013-09-18 10:59:54
ynkuaile
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| 膜蛋白在水相中可溶嗎（我認(rèn)為不可溶）？去除表面活性劑之后，蛋白還有活性嗎（我認(rèn)為會沉淀的）？將膜蛋白轉(zhuǎn)移到水相的辦法就是用表面活性劑。不可以去除表面活性劑。非要去除表面活性劑的方法也有很多，比如稀釋，透析……，但是你的膜蛋白會沉或形成大的聚集體。如果你過分子篩，一定要加表面活性劑，不加的話，蛋白質(zhì)到了沒有表面活性劑助溶的溶液中就會析出，會堵你的分子篩的。表面活性劑一般不影響后續(xù)試驗(yàn)，建議保留或換另一種表面活性劑。 |
6樓2013-09-18 11:52:01
小墨825
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7樓2013-09-18 15:31:17
小墨825
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8樓2013-09-18 16:09:58
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對不起，我不太了解你的課題以及實(shí)驗(yàn)步驟，我能提供的幫助有限，只說一些個人想法，希望對你有用。 1. 我認(rèn)為表面活性劑是一頭親水，一頭疏水的，那么他與水溶液互溶時，我覺得有兩種情況，要么油包水，要么水包油，我覺得分層的現(xiàn)象，應(yīng)該不是去垢劑的原因，我覺得去垢劑與水是互溶的。不好意思，了解甚少。分層這點(diǎn)希望你能教我。 2. 你說之前過柱都不去除去垢劑，是因?yàn)闈舛鹊�。我覺得高濃度的表面活性劑能使蛋白質(zhì)變性，盡管是非離子型的。濃度低一點(diǎn)能提取出來嗎？我覺得幾個CMC的濃度就應(yīng)該可以了。 3. 換成另一種表面活性劑是可以的，但是選哪一種表面活性劑是難點(diǎn)。我覺得一般用一種便宜的去垢劑提取，后期換成需要的去垢劑。 互相學(xué)習(xí)，分層的現(xiàn)象麻煩你教我，你們實(shí)驗(yàn)室其他的也分層嗎？ |
9樓2013-09-18 19:46:31
小墨825
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10樓2013-09-19 16:44:09
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