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XLK2011木蟲 (正式寫手)
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多重PCR，共有四個(gè)位點(diǎn)擴(kuò)增，其中有一個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增效率很低，應(yīng)該怎么調(diào)整反應(yīng)體系？
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| 多重PCR，共有四個(gè)位點(diǎn)擴(kuò)增，其中有一個(gè)位點(diǎn)的擴(kuò)增效率很低。單獨(dú)就這一個(gè)位點(diǎn)做單重PCR，擴(kuò)增曲線還可以，多重PCR時(shí)，就很差，應(yīng)該怎么調(diào)整反應(yīng)體系？ |
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SHIPINANGEL
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3樓2016-01-20 08:44:16
keydy
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【答案】應(yīng)助回帖
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感謝參與，應(yīng)助指數(shù) +1
myprayer: 金幣+1, 贈(zèng)人玫瑰，手有余香。分子生物期待你更多精彩 。 2013-09-25 15:43:19
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單獨(dú)擴(kuò)增曲線OK，說明引物設(shè)計(jì)沒有問題。而多重?cái)U(kuò)增出現(xiàn)一個(gè)點(diǎn)較弱，就體系而言，我建議： 1.增加那個(gè)較"弱"的點(diǎn)的引物量，或者/并且減少"強(qiáng)"點(diǎn)的引物量，這點(diǎn)比較難把握，因?yàn)椴煌蛐蛄邢鄬?duì)的引物終濃度有明顯的差異 (0.04–0.6 μ M) ，這很大程度上取決于經(jīng)驗(yàn)。 2.至于其它的組分，如dNTP,MgCl2,Buffer,模板和酶甚至佐劑我都認(rèn)為沒有優(yōu)化的必要。 你只是提問了“反應(yīng)體系”，說明你對(duì)PCR循環(huán)參數(shù)什么的很有信心，我也就不畫蛇添足了。 祝好運(yùn)。 |
2樓2013-09-25 10:23:56
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