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862202686鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
新手做原核表達(dá) 求幫忙
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老師讓我做效應(yīng)蛋白原核表達(dá)，只是給了我一個(gè)蛋白序列的登陸號(hào)，其他自己摸索。 在看文獻(xiàn)問百度之后，了解了效應(yīng)蛋白，明白了原核表達(dá)的基本步驟。梳理一下： 1.提RNA。（因?yàn)槭钦婢�，有�?nèi)含子，只能反轉(zhuǎn)錄。） 2.設(shè)計(jì)引物。 3.反轉(zhuǎn)錄PCR。 4.連接T載體，轉(zhuǎn)入感受態(tài)，挑陽性克隆送去測(cè)序，驗(yàn)證所得序列是否正確。 5.假設(shè)序列正確，提質(zhì)粒，酶切，連接表達(dá)載體，轉(zhuǎn)入表達(dá)菌。 不知道這樣的步驟有哪些地方有錯(cuò)誤或者不合理，希望大家給予指正，萬分感謝。 還有，我現(xiàn)在想要設(shè)計(jì)引物，因?yàn)槔蠋熤唤o了一個(gè)蛋白序列的登錄號(hào)，我水平有限，在NCBI上只能獲得該氨基酸序列對(duì)應(yīng)的cDNA序列，并不能獲得完整的cDNA序列，因?yàn)闆]有兩端的序列，我就不能設(shè)計(jì)引物，求幫助！ 我是新蟲，只有21個(gè)金幣，真心感謝大神們的幫助指導(dǎo)！ |
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11樓2013-09-26 11:43:25
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9樓2013-09-26 10:23:16
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10樓2013-09-26 10:26:45
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