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862202686鐵蟲 (初入文壇)
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[求助]
新手做原核表達 求幫忙
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老師讓我做效應(yīng)蛋白原核表達，只是給了我一個蛋白序列的登陸號，其他自己摸索。 在看文獻問百度之后，了解了效應(yīng)蛋白，明白了原核表達的基本步驟。梳理一下： 1.提RNA。（因為是真菌，有內(nèi)含子，只能反轉(zhuǎn)錄。） 2.設(shè)計引物。 3.反轉(zhuǎn)錄PCR。 4.連接T載體，轉(zhuǎn)入感受態(tài)，挑陽性克隆送去測序，驗證所得序列是否正確。 5.假設(shè)序列正確，提質(zhì)粒，酶切，連接表達載體，轉(zhuǎn)入表達菌。 不知道這樣的步驟有哪些地方有錯誤或者不合理，希望大家給予指正，萬分感謝。 還有，我現(xiàn)在想要設(shè)計引物，因為老師只給了一個蛋白序列的登錄號，我水平有限，在NCBI上只能獲得該氨基酸序列對應(yīng)的cDNA序列，并不能獲得完整的cDNA序列，因為沒有兩端的序列，我就不能設(shè)計引物，求幫助！ 我是新蟲，只有21個金幣，真心感謝大神們的幫助指導(dǎo)！ |
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862202686
鐵蟲 (初入文壇)
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862202686
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