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請教有關(guān)Westen Blot抗體有關(guān)的問題
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最近在做蛋白質(zhì)印跡，要買抗體，什么都不懂，急需各位大神的交流指導(dǎo)。 我們做的是從人細胞中提取出來的蛋白，現(xiàn)在主要存在兩個問題： 1 哪家的抗體質(zhì)量好、價格比較優(yōu)惠，多數(shù)做蛋白的都選擇的品牌 2 一抗有很多不同的種屬來源，我應(yīng)該選擇同源的，比如我檢測的是人細胞蛋白，就選人源的，或者異源的，比如我?guī)熜仲I的就是兔源的，這個有什么選擇標(biāo)準(zhǔn)嗎？ 本人現(xiàn)在已經(jīng)研三了，急著做完蛋白這塊要畢業(yè)了，跪求指導(dǎo)呀�。�！ |
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1.抗體的選擇可以上NCBI檢索Protein中你的目的蛋白，右側(cè)有一個抗體的鏈接（連到http://www.labome.com）上面有該抗體哪些公司有。Abcam不錯，但貴。Santa Cruz種類多，濃度低，便宜，但質(zhì)量波動大。Cell Signaling Technology(CST)質(zhì)量不錯，信號傳導(dǎo)和磷酸化抗體是強項。sigma可以提供小包裝的，內(nèi)參抗體不錯，價格也可以。關(guān)鍵是不同的抗原各公司的抗體不一定有。我做線蟲的抗體就很難找，有的只有一家公司有。 2.抗體種屬。一般由于哺乳動物蛋白同源性高，一般的抗體會適用于人，大鼠，小鼠。具體的蛋白針對的種屬要查抗體說明書（在各公司網(wǎng)站查）。要注意抗原表位的序列尤其是可能突變的位置。只要標(biāo)明可用于人均可。查找時可以參考高水平文獻用過的抗體。 3.如果沒有其他要求，選種屬范圍大的，可以使實驗室其他人或其他實驗組都受益。習(xí)慣和周圍的人交換抗體可以節(jié)約成本，而且節(jié)約摸條件的時間。幫別人帶樣或互為對照，有時也挺好的（摸條件且樣品不多時）。 4.選好匹配的二抗。 5.最有用的抗體資料是各公司相應(yīng)的說明書，多讀細讀。和周圍wb的多交流。 |
9樓2013-09-27 10:17:20
0624410024
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你的蛋白是人的細胞的，那你的一抗就只要能識別人的細胞蛋白就行了，不管一抗是否異源，只是你選擇二抗的時候不同而已。如果你的一抗選擇的是小鼠來源抗體，你的二抗就要用抗小鼠的；如果你的一抗是選擇的兔子來源的，那你的二抗就要用抗兔的。我有鼠單抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50以及兔多抗Anti-p38 MAPK，暫時還沒有Anti-RAGE的抗體，鼠單抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50都能識別人細胞裂解液。如果有需要或者其他不懂的地方都可以聯(lián)系我。 |
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14樓2013-10-16 20:58:50
cicelyzh
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kx444555: 金幣+1, 鼓勵交流 2013-09-27 10:13:22
| 一般商業(yè)化的抗體都比較好，大一點的公司質(zhì)量更有保證一些。主要是有你要買的抗體就行。至于抗體種屬來源，一般而言，同源的可能會比較好，異源有時候也可以用的，主要看你做的蛋白的保守性和抗體制作的方法。如果你做的是人源蛋白，如果有人源相應(yīng)抗體賣就買人源的。 |
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2樓2013-09-27 01:58:35
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Abcam公司 是世界有名的抗體王國，以優(yōu)質(zhì)、齊全的產(chǎn)品、完善的網(wǎng)絡(luò)支持功能和強大的技術(shù)支持隊伍得到全球客戶的認可和贊譽。并在2004年獲得了對于生物界公司不可多得的英女王獎，擁有很好的知名度和口碑。 如果你做的不是什么通路研究，一抗的選擇上種屬沒有限制，只要親和力和，WB效果好就行了。沒問題。 |
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3樓2013-09-27 08:41:23
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6樓2013-09-27 09:21:27
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7樓2013-09-27 09:21:41
8樓2013-09-27 09:30:46
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