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[求助]
請教有關Westen Blot抗體有關的問題
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最近在做蛋白質印跡,要買抗體,什么都不懂,急需各位大神的交流指導。 我們做的是從人細胞中提取出來的蛋白,現(xiàn)在主要存在兩個問題: 1 哪家的抗體質量好、價格比較優(yōu)惠,多數(shù)做蛋白的都選擇的品牌 2 一抗有很多不同的種屬來源,我應該選擇同源的,比如我檢測的是人細胞蛋白,就選人源的,或者異源的,比如我?guī)熜仲I的就是兔源的,這個有什么選擇標準嗎? 本人現(xiàn)在已經研三了,急著做完蛋白這塊要畢業(yè)了,跪求指導呀!! |
分子生化實驗經驗積累 |
金蟲 (正式寫手)
Begging for knowledge
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你的蛋白是人的細胞的,那你的一抗就只要能識別人的細胞蛋白就行了,不管一抗是否異源,只是你選擇二抗的時候不同而已。如果你的一抗選擇的是小鼠來源抗體,你的二抗就要用抗小鼠的;如果你的一抗是選擇的兔子來源的,那你的二抗就要用抗兔的。我有鼠單抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50以及兔多抗Anti-p38 MAPK,暫時還沒有Anti-RAGE的抗體,鼠單抗Anti-NFkB p65、Anti-NFkB p105 / p50都能識別人細胞裂解液。如果有需要或者其他不懂的地方都可以聯(lián)系我。 |

鐵桿木蟲 (職業(yè)作家)

鐵蟲 (正式寫手)

送紅花一朵
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送紅花一朵
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送紅花一朵
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木蟲 (正式寫手)
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1.抗體的選擇可以上NCBI檢索Protein中你的目的蛋白,右側有一個抗體的鏈接(連到http://www.labome.com)上面有該抗體哪些公司有。Abcam不錯,但貴。Santa Cruz種類多,濃度低,便宜,但質量波動大。Cell Signaling Technology(CST)質量不錯,信號傳導和磷酸化抗體是強項。sigma可以提供小包裝的,內參抗體不錯,價格也可以。關鍵是不同的抗原各公司的抗體不一定有。我做線蟲的抗體就很難找,有的只有一家公司有。 2.抗體種屬。一般由于哺乳動物蛋白同源性高,一般的抗體會適用于人,大鼠,小鼠。具體的蛋白針對的種屬要查抗體說明書(在各公司網站查)。要注意抗原表位的序列尤其是可能突變的位置。只要標明可用于人均可。查找時可以參考高水平文獻用過的抗體。 3.如果沒有其他要求,選種屬范圍大的,可以使實驗室其他人或其他實驗組都受益。習慣和周圍的人交換抗體可以節(jié)約成本,而且節(jié)約摸條件的時間。幫別人帶樣或互為對照,有時也挺好的(摸條件且樣品不多時)。 4.選好匹配的二抗。 5.最有用的抗體資料是各公司相應的說明書,多讀細讀。和周圍wb的多交流。 |
木蟲 (正式寫手)
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