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HeLa細(xì)胞傳代后90% 死亡,求解
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本人菜鳥(niǎo),才開(kāi)始學(xué)養(yǎng)細(xì)胞。 替別人傳 細(xì)胞,結(jié)果HeLa細(xì)胞狀態(tài)好,長(zhǎng)的太快,本是第二天下午傳的,結(jié)果沒(méi)時(shí)間,第三天中午傳的。因?yàn)榧?xì)胞長(zhǎng)的很滿,不過(guò)也有很多死細(xì)胞,就一個(gè)大瓶傳了一個(gè)中瓶,兩個(gè)大瓶。鏡檢,三個(gè)瓶子中細(xì)胞濃度很大。根據(jù)以前的經(jīng)驗(yàn),長(zhǎng)一天絕對(duì)很滿。結(jié)果第四天早上,也就是今天早晨看的時(shí)候,90%的細(xì)胞飄起來(lái)了,只有10%細(xì)胞貼壁生長(zhǎng),而且狀態(tài)不好。 這次的培養(yǎng)基是新配的,初步認(rèn)為可能是新配置的培養(yǎng)基沒(méi)有混合均勻,因?yàn)槲壹尤隖BS和雙抗之后,只是左右晃動(dòng)幾下培養(yǎng)基,10min之后開(kāi)始用這個(gè)培養(yǎng)基(配置培養(yǎng)基后才開(kāi)始消化細(xì)胞),不知道是不是這個(gè)原因。 雙抗是找別人借的,人家說(shuō)濃度是100 X 的。DMEM是新的,F(xiàn)BS是用過(guò)的,冰箱放置了約3天吧。 其次是前天傳了一批自己養(yǎng)的HeLa細(xì)胞,培養(yǎng)基是以前的,昨天看還是可以的,死細(xì)胞不多,只是貼壁細(xì)胞不多,但是今天早上看的時(shí)候,也是很多死細(xì)胞,狀態(tài)不好,不知道什么原因。 不知道是不是污染導(dǎo)致這些細(xì)胞離我而去?求大俠們解答。 |
分子生化實(shí)驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)積累 |
金蟲(chóng) (小有名氣)
木蟲(chóng) (小有名氣)
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親!細(xì)胞消化只要肉眼可見(jiàn)培養(yǎng)瓶底部細(xì)胞脫落就可以加培養(yǎng)基進(jìn)行輕柔吹打,一般消化在1~2min,具體以觀察為準(zhǔn)。消化8分鐘居然還能有10%活細(xì)胞真的是奇跡了。。。。 培養(yǎng)液里面有沒(méi)有臟臟的感覺(jué)? |

至尊木蟲(chóng) (正式寫(xiě)手)

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