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HeLa細胞傳代后90% 死亡，求解
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本人菜鳥，才開始學養(yǎng)細胞。 替別人傳 細胞，結果HeLa細胞狀態(tài)好，長的太快，本是第二天下午傳的，結果沒時間，第三天中午傳的。因為細胞長的很滿，不過也有很多死細胞，就一個大瓶傳了一個中瓶，兩個大瓶。鏡檢，三個瓶子中細胞濃度很大。根據(jù)以前的經(jīng)驗，長一天絕對很滿。結果第四天早上，也就是今天早晨看的時候，90%的細胞飄起來了，只有10%細胞貼壁生長，而且狀態(tài)不好。 這次的培養(yǎng)基是新配的，初步認為可能是新配置的培養(yǎng)基沒有混合均勻，因為我加入FBS和雙抗之后，只是左右晃動幾下培養(yǎng)基，10min之后開始用這個培養(yǎng)基（配置培養(yǎng)基后才開始消化細胞），不知道是不是這個原因。 雙抗是找別人借的，人家說濃度是100 X 的。DMEM是新的，F(xiàn)BS是用過的，冰箱放置了約3天吧。 其次是前天傳了一批自己養(yǎng)的HeLa細胞，培養(yǎng)基是以前的，昨天看還是可以的，死細胞不多，只是貼壁細胞不多，但是今天早上看的時候，也是很多死細胞，狀態(tài)不好，不知道什么原因。 不知道是不是污染導致這些細胞離我而去？求大俠們解答。 |
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5樓2013-09-30 09:17:36
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| 傳代后狀態(tài)不好或者死的一般就四個原因：1.接觸細胞的液體溫度過低2.胰酶濃度過高或者消化時間過長3.吹打分散時力度過大或吹打時間過長4.細胞污染。你的DMEM培養(yǎng)基從4℃冰箱拿出來之后有沒有經(jīng)過溫箱復溫？一般在換液或者傳達之前要把培養(yǎng)基、PBS、胰酶放進37℃溫箱復溫30min左右。細胞狀態(tài)本來很好的話接觸涼的培養(yǎng)基一般都會變的很差，狀態(tài)不好的細胞接觸涼的培養(yǎng)基一般都會掛掉。由于沒說你胰酶使用濃度，所以不好判斷是不是消化過頭，或者吹打分散細胞時太大力。細胞污染很容易判斷，傳代后培養(yǎng)基變渾濁，或者顏色變黃或者鏡檢能看到很多小黑點就是污染了。 |
6樓2013-09-30 14:09:30
7樓2013-09-30 19:00:27
【答案】應助回帖
感謝參與，應助指數(shù) +1
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Hela細胞，長得快，但是非常矯情的一個細胞系。別的細胞系不換培養(yǎng)液都是一個個的死，及時補換培養(yǎng)液還是有救的。Hela細胞要死那就是商量好了，一瓶一瓶的死，一個不拉的去見馬克思。 高糖培養(yǎng)液基本不會餓死細胞系，除了變成非常黃的時候。 覺得可能還是消化、重懸的哪一個步驟出了問題。 采用含EDTA的胰酶消化效果會好很多，海拉細胞消化的話基本是一粒一粒的，不像其他的細胞會一團一團的下來（但是一團一團消化下來的細胞貼壁、生長的可能會更快）。 Hela細胞個人覺得不適合新手練手的，因為這細胞非常矯情。很容易一個不留的死光光。覺得hela細胞優(yōu)勢就是長得快，缺點就是非常容易死光光（別的細胞系都是一個一個的死，這貨真是一瓶一瓶的死）。 養(yǎng)細胞不要怕，多練幾次就好，Hela細胞養(yǎng)死了就不要花心思拯救，直接換一批新的Hela細胞就好 |
8樓2013-09-30 22:37:27
超然渡陳
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9樓2013-10-01 22:51:43
10樓2013-10-07 15:00:15
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